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진단시약원료 효소

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준비 및 사양

< table class="darkGray"> 외관 올리브그린 솔루션 활동 등급Ⅴ 150,000 U/ml 이상

응용 프로그램

이 효소는 임상 분석에서 과산화수소의 간섭을 제거하는 데 유용합니다.

< div class="sectionBlock03 mb30">

분석

원칙

Principle

과산화수소의 소멸 정도는 티타늄 색법 ¹⁾으로 측정합니다.

단위 정의

아래 설명된 조건에서 1단위는 분당 1마이크로몰의 과산화수소를 가수분해합니다.

방법

시약

A. 10mM 인산염 완충액, pH 7.0(25℃에서)
B. H₂O₂ 용액	16mM［0.182ml의 30%(W/V)H₂O₂/100ml 버퍼 A](신선하게 준비하여 얼음에 보관해야 합니다.)
다. 티타늄 시약	(Nacalai tesque)
D. 효소 희석제	버퍼 A

과정

1.0.25ml의 기질용액(B)을 시험관에 넣고 20℃에서 평형화시킵니다. 25℃ 약 5분간

2.효소액* 0.25ml를 넣고 섞어주세요.

3.25°에서 정확히 5분 후 티타늄 시약(C) 2.5ml를 첨가하여 반응을 중지하고 물에 대한 광학 밀도를 410nm에서 측정합니다(OD 테스트)
동시에 25°C에서 5분 동안 배양한 후 먼저 기질 용액을 2.5ml의 티타늄 시약과 혼합하고 이어서 효소 용액(OD 블랭크)을 첨가하여 블랭크를 준비합니다.

^*얼음처럼 차가운 효소 희석제(D)를 사용하여 효소 제제를 0.35-1.35U/ml로 희석합니다.

< div class="mb30">

계산

활동은 다음 공식을 사용하여 계산할 수 있습니다:

볼륨 활동(U/ml) =
&# x394;OD(OD 공백-OD 테스트)×Vt×df
F×t×1.0×Vs

= ΔOD/min×2.4×1/F×df

체중 활성도(U/mg) = (U/ml)×1 /C

Vt	: 총 용량(3.0ml)
Vs	: 시료량(0.25ml)
F	: 티타늄 색상의 소멸계수 1.0mM 과산화수소의 존재로 개발된 제품(F는 알려진 과산화수소 농도를 사용하여 티타늄 시약의 각 로트에서 결정되어야 합니다. F는 보통 0.7 정도입니다.)
t	: 반응 시간(5분)
1.0	: 광선 길이(cm)
df	: 희석 계수
C	: 용해 중 효소 농도(c mg/ml)

참조

1)F.Patti 및 PB-Maury; Bull.Soc.Chem.Biol.,35, 1177 (1953)

표 1. 다양한 화학물질이 카탈라제에 미치는 영향

[10mM K-인산염 완충액, pH 7.0(200U/ml)에 용해된 효소를 각 화학물질과 함께 25°C에서 배양했습니다. 1시간 동안.]

화학 농도(mM) 잔류 활성(%)< /th>
없음 - 100
금속염 2.0
AgNO₃ 76.6
BaCl₂ 99.6
CaCl₂ 62.4
CoCl₂ 101.2
CuSO ₄ 99.7
FeSO₄ 98.2
MgSO₄ 99.2< /td>
MnCl₂ 28.7
NiCl₂ 53.6
ZnCl₂ 96.1
< div class="tableWrap">< tr>< tr>
화학 농도(mM) 잔류활성도(%)
NaF 2.0 89.3
NaN3 2.0 3.8
EDTA 5.0 96.6
IAA 2.0 99.4
붕산염 20 98.8
SDS 0.05% 96.1
트리톤 X-100 0.10% 95.7
브리지 35 0.10% 97.8
스팬 20 0.10% 94.5
나콜레이트 0.10% 95.3

화학	농도(mM)	잔류 활성(%)< /th>
없음	-	100
금속염	2.0
AgNO₃		76.6
BaCl₂		99.6
CaCl₂		62.4
CoCl₂		101.2
CuSO ₄		99.7
FeSO₄		98.2
MgSO₄		99.2< /td>
MnCl₂		28.7
NiCl₂		53.6
ZnCl₂		96.1

화학	농도(mM)	잔류활성도(%)
NaF	2.0	89.3
NaN3	2.0	3.8
EDTA	5.0	96.6
IAA	2.0	99.4
붕산염	20	98.8
SDS	0.05%	96.1
트리톤 X-100	0.10%	95.7
브리지 35	0.10%	97.8
스팬 20	0.10%	94.5
나콜레이트	0.10%	95.3

EDTA, 에틸렌디아민테트라아세테이트; IAA, 요오도아세트아미드; SDS, 도데실황산나트륨;
DAC, 디메틸벤질알킬암모늄 염화물

그림 1. 안정성(액체 형태)
그림 2. pH-활성
10mM 완충 용액: pH 5-8,K-인산염; pH 7.5-10, Tris-HCl
그림 3. 온도 활동
(10mM K-인산염 완충액, pH 7.0)
그림 4. pH-안정성
10mM 완충액: pH 5-8,K-인산염; pH 7.5-10, Tris-HCl.효소 농도: 1U/ml
그림 5. 열 안정성
10mM K-인산염 완충액, pH 7.0으로 30분간 처리. 효소 농도: 200U/ml

	= ΔOD/min×2.4×1/F×df
U/mg	=U/ml×1/C
F	1.0 mM 과산화수소에 의한 티타늄 착색 생성물의 흡광계수 )
1.0	광로 길이(cm)
C	용해시 효소 농도(c mg/ml)

준비 및 사양

응용 프로그램

분석

원칙

단위 정의

방법

시약

과정

계산

참조

표 1. 다양한 화학물질이 카탈라제에 미치는 영향

活性測결정법 (일본어)