진단시약원료 효소

PREPARATION and SPECIFICATION

< td>≤0.01mg/g
AppearanceWhite amorphous powder, lyophilized
ActivityGradeⅢ
ContaminantsInorganic phosphate
Alkaline phosphatase≤1×10-4 U /mg

PROPERTIES

Stability Stable at 4℃ for at least 6 months(Fig.4)
Molecular weightapprox. 22,000 (SDS-PAGE)

APPLICATIONS

This peptide fragment is useful as a blocking reagent for ELISA, being an alternative to BSA.

FEATURES

< tr>
1. EfficiencyExcellent blocking performance.(그림 1)
2. Operation TimShorter time of operation(그림 2)
3. SensitivityNo interference on ELISA assay(그림 3)

Examples< /h2>

  • Fig. 1. BPF-BSA Comparison: Blocking Efficiency

    Fig.1. BPF-BSA Comparison: Blocking Efficiency

    Peroxidase solutions containing BPF -301 or BSA were added to 96 wells polystyrene plate. The plate was incubated at 37℃ for 1hr and then washed with 0.02% Tween20. The blocking performance was evaluated by measuring the peroxidase the higher blocking performance. Blocking performance of BPF-301 is much higher than that of BSA.

  • Fig.2. BPF-BSA Comparison: Blocking Time

    Fig.2. BPF-BSA Comparison: Blocking Time

    BPF-301 or BSA solution was added to 96 wells polystyrene plate. The plate containing these blocking reagent was incubated at 4℃ for 5~180 minutes, and then washed with 0.02% Tween by human serum and anti-human IgG goat antibody POD conjugate system. Operation time required for blocking reaction is shorter than that of BSA.

  • Fig.3. BPF-BSA Comparison: Measuring sensitivity

    Fig.3. BPF-BSA Comparison: Measuring sensitivity

    BPF-301 or BSA was used as a blocking reagent in ELISA assay for detection of hCEA. It was shown that no interference on ELISA assay was found in BPF-301.

    >

  • Fig.4. Stability (Powder form)

    < p class="ttl">Fig.4. Stability (Powder form)

    Blocking performance was measured by the method mentioned in Fig.1.

    • < /ul>

사용 예(Japanese)

예-1: 차단 능력의 간이 측정법

1. 시약

  • BPF 용액
    5 ㎎의 BPF-301을 PBS 10ml에 용해시킨다.
  • BSA 용액(대조 실험용)
    100mg의 BSA를 PBS 10ml에 용해시킨다.
  • POD 용액 <2> ㎎의 Peroxidase (TOYOBO PEO-131)를 상기 BPF 용액 또는 BSA 용액 1ml에 용해시킨다.
  • 플레이트 세척액 0.02g의 Tween20을 100ml의 PBS에 용해시킨다.
  • TMB 솔루션
    BioRad TMB substrate Kit (Cat.No.:172-1067)

2. 절차

< 1.BPF 용액(시약 A) 또는 BSA 용액(시약 B)으로 POD 용액(시약 C)을 희석한다.

2. 상기 POD 희석액 100&l을 96-홀 폴리스티렌 플레이트에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다.

3. 플레이트의 용액을 버리고 플레이트 세척액(시약 D)으로 플레이트를 세척한다.

4.TMB 용액(시약 E) 100ℓ을 첨가하고, 37℃에서 10분간 인큐베이션하고 발색시킨다.

5.1N H2SO4100μl의 첨가에 의한 반응 를 정지한 후, 450nm에서의 흡광도를 측정한다. 흡광도가 낮을수록 차단능이 높다.

3. 결과

우수한 차단능력이 확인되었다. (그림 1 참조)

예-2: BPF-301과 BSA 작업 시간 비교

1. 시약

  • BPF 용액
    : 7㎎의 BPF-301을 10ml의 20mM Tris-HCl, pH7.0에 용해 한다.
  • BSA 용액 (대조 실험용) : 24 mg BSA를 10 ml 20 mM Tris-HCl, pH 7.0에 용해시킨다.
  • 인간 혈청 희석액 : PBS로 인간 혈청을 희석한다(50배 희석).
  • 플레이트 세정액: 0.02g의 Tween20을 100ml의 PBS에 용해시킨다.
  • TMB 용액
    : BioRad TMB substrate Kit (Cat.No.:172-1067)
  • anti-human IgG goat antibody POD conjugate

2. 절차

1.BPF 용액(시약 A) 또는 BSA 용액(시약 B)100μ l을 96 홀 폴리스티렌 플레이트에 첨가하고 4 ~ 3 ~ 3 시간 동안 배양한다.

2. 플레이트 중의 용액을 버리고, 인간 혈청 희석액(시약 C) 25μl을 첨가한다.

3. 플레이트의 용액을 버리고 플레이트 세척액(시약 D)으로 플레이트를 세척한다.

4.anti-human IgG goat antibody POD conjugate(시약 F)50μl을 첨가, 37℃에서 1시간 인큐베이션.

5. 플레이트의 용액을 버리고 플레이트 세척액(시약 D)으로 플레이트를 세척한다.

6. TMB 용액(시약 E) 50μl을 첨가하고, 실온에서 5분간 인큐베이션하고 발색시킨다.

7.1N H2SO450μl의 첨가에 의한 반응 를 정지한 후, 450nm에서의 흡광도를 측정한다. 흡광도가 낮을수록 차단능이 높다.

3. 결과

BSA보다 짧은 작동 시간으로 높은 차단 능력이 얻어졌다. 조작 시간은 30분이면 충분하였다. (그림 2 참조)

예-3: BPF와 BSA의 감도 비교

1. 시약

  • BPF 용액: 7 mg BPF-301을 10 ml 20 mM Tris-HCl, pH 7.0에 용해시킨다.
  • BSA 용액(대조 실험용): 24 mg BSA를 10 ml 20 mM Tris-HCl, pH 7.0에 용해시킨다.
  • 플레이트 세정액: 0.02g의 Tween20을 100ml의 PBS에 용해시킨다.
  • TMB 용액
    : BioRad TMB substrate Kit (Cat. No.:172-1067)
  • hCEA MoAb 용액
    : carbonate buffer, pH9.6에서 hCEA 희석 (10ug/ml).
  • CEA MoAb-POD conjugate
    : carbonate buffer, pH9.6에서 CEA MoAb-POD conjugate를 희석한다(250배 희석).
  • hCEA 표준액

2. 절차

1. hCEA MoAb (시약 E) 100 & # x3BC; l을 96 홀 폴리스티렌 플레이트에 첨가하고 37 ℃에서 1 시간 동안 배양한다.

2.BPF 용액(시약 A) 또는 BSA 용액(시약 B) 100μl을 첨가, 4℃에서 3시간 인큐베이션 한다.

3. 플레이트 중의 용액을 버리고, hCEA 표준액(시약 G) 50μl을 첨가, 37℃에서 1시간 인큐베이션.

4. 플레이트의 용액을 버리고 플레이트 세척액(시약 C)으로 플레이트를 세척한다.

5.CEA MoAb-POD conjugate(시약 F) 50μl을 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한다.

6. 플레이트의 용액을 버리고 플레이트 세척액(시약 C)으로 플레이트를 세척한다.

7. TMB 용액(시약 D) 50μl을 첨가하고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하고 발색시킨다.

8.1N H2SO450μl의 첨가에 의한 반응 를 정지한 후, 450nm에서의 흡광도를 측정한다. 흡광도가 낮을수록 차단능이 높다.

3. 결과

ELISA 분석에 대한 억제는 전혀 검출되지 않았다. (그림 3 참조)

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