TOYOBO BIO

진단시약원료 효소

GLUCOSE DEHYDROGENASE

준비 및 사양

< th align="left">활동

이 효소는 D-글루코스의 효소 측정에 유용합니다.

Principle

NTB(니트로테트라조륨블루)를 페나진 메토황산염(PMS)(적색)으로 환원하여 형성된 디포마잔의 모습을 분광광도법으로 570nm에서 측정합니다.

1개 단위는 다음 조건 하에서 분당 0.5마이크로몰의 디포르마잔을 형성합니다. 아래 설명된 조건.

A. D-글루코스 용액	1M [1.8g D-글루코스(MW=180.16)/10ml H₂O] 이 용액을 사용하기 최소 3시간 전에 실온에 보관하십시오.	td>
B. PIPES-NaOH 완충액, pH 6.5	50mM [중량 1.51g의 PIPES(MW=302.36)를 H2O 60ml에 현탁시키고 5N NaOH에 녹인 후 2.2ml를 첨가합니다. Triton X-100 10% 함유. 25℃에서 pH를 6.5±0.05로 조정한 후; 5N NaOH로, H₂O]
C로 최대 100ml를 채웁니다. PMS 용액	3.0mM [9.19mg 페나진 메토설페이트(MW=306.34)/10ml H₂O]
디. NTB 용액	6.6mM [53.96mg 니트로테트라조륨블루(MW=817.65)/10ml H₂O]
E. 효소 희석제	50mM PIPES-NaOH 완충액, 1mM CaCl₂ 함유 pH 6.5, 0.1% Triton X-100, 0.1% BSA

1.다음 반응 혼합물을 갈색 병에 준비하고 얼음 위에 보관합니다. (갓 준비하세요)

2.작업 용액 3.0ml를 피펫으로 사용 시험관(플라스틱 관)에 넣고 37°C에서 평형을 이룬다. 약 5분 동안.

3.효소 용액* 0.1ml를 첨가하고 가볍게 뒤집어 섞습니다.

4.37°로 온도가 조절된 분광 광도계에서 4~5분 동안 물에 대해 570nm에서 광학 밀도의 증가를 기록하고 분당 OD를 계산합니다. 곡선의 초기 선형 부분(ΔOD test)과 동시에 효소 희석제(E)가 효소 용액 대신 첨가합니다.

^*효소 제제를 얼음처럼 차가운 효소 희석제(E)에 녹이고 희석합니다. 분석 직전에 동일한 완충액으로 0.1−0.8U/ml. (끈적끈적한 특성 때문에 플라스틱 튜브 사용을 권장합니다.)

활동량은 다음 공식을 사용하여 계산할 수 있습니다:

체중 활동도(U/mg) = (U/ml)×1/C

1)K. Matsushitaet al. ; FEMS Microbiology Letters, 55, 53 (1988).

< ul class="picList">

[The enzyme dissolved in 50mM PIPES-NaOH buffer, pH 6.5 contg. 1mM CaCl₂, 0.1% X-100 (5U/ml) was incubated with each chemical at 25℃ for 1hr.]

< /tr>< /tr>

문의하기

생명과학 연구용 시약에 관한 궁금하신 점을 문의해주세요.
빠른 시일 내에 답변드리겠습니다.