진단시약원료 효소

준비 및 사양

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성상백색 무정형 분말(무염), 동결건조
활동등급Ⅰ 30U/mg-고체 이상

속성

< th align="left" class="w33p">안정성 < td> 45℃ 이하 (pH 5.5, 10분) (그림 6)
−20℃에서 안정적 최소 1년 동안 (그림 1)
분자량 대략. 70,0001)
미카엘리스 상수1) 11± ;1.1×10-4 M(말토오스), 3.6±0.51×10-4M(말토트리오스), 2.5±0.33×10-4M(말토테트라오스), 1.6±0.02×10-4M(말토펜타오스)
구조 당단백질［E 280nm 1cm (1%)=14.5] 1cm
최적 pH 4.5−5.0 (그림 .3)
최적 온도 60℃ (그림 4)
pH 안정성 pH 4.0−8.5 ( 25℃, 20시간) (그림 5)
열 안정성
기질 특이성1,2 ) 이 효소는 가용성 전분, 아밀로펙틴, 글리코겐 또는 β-한계 덱스트린, 아밀로스, 말토올리고당 및 파노스를 완전히 가수분해합니다.

애플리케이션

이 효소는 탄수화물의 구조 조사 및 임상 분석에서 관련 효소와 결합 시 α-아밀라제의 효소적 측정에 유용합니다.

< h2 class="ttl_bigLine">분석

원리

Principle

포도당의 형성은 수정된 Fehling-Lehmann-Schoorl 방법을 통해 환원당으로 측정됩니다.

단위 정의

아래 설명된 조건에서 1단위는 30분 안에 10mg의 포도당을 형성합니다.

방법

시약

A. 전분용액1.0%［수용성전분(Merck) 1.0g을 H2O 90ml에 현탁하고 3분간 끓여 녹인 후 실온으로 식힌다. 1.0M 아세트산 완충액(pH 4.5) 5.0ml를 첨가하고 H2O로 100ml까지 채웁니다.] (새로 준비해야 함)
B. 알칼리 용액NaOH 100g, 로셸염 365g・4H2O/H2O 1,000ml
다. CuSO4 용액7.0%(70g CuSO4・5H2O/1,000ml of H2 O)
D. KI 용액30%(KI 300g/H2O 1,000ml)(갈색병에 보관)
E. H2SO4 해결책25%
F. Na2S2O3 용액50mM(49.638g Na2S< sub>2O3・5H2O, 4.0g Na2CO3(안정제 )/4,000ml H2O)(갈색병에 담아 3~4일간 보관한 후 사용)
지. 효소 희석제10mM 아세트산 완충액, pH 4.5

절차

1. 기질용액(A) 4.0ml를 시험관(32×200mm)에 피펫팅하여 40×2103; 약 5분 동안.

분석 혼합물의 농도< /th>
아세테이트 버퍼42 mM
전분0.8%

2. 효소액* 1.0ml를 넣고 섞어주세요.

3. 40℃에서 정확히 15분 후 알칼리용액(B) 2.0ml를 첨가하여 반응을 멈춘다.
동시에 기질용액과 알칼리용액 2.0ml를 먼저 섞어 블랭크를 준비한다. 40℃에서 15분간 배양한 후 효소 용액을 첨가합니다.

4. CuSO4 용액(C) 2.0ml를 넣고 증발을 방지하기 위해 시험관을 대리석(40mmφ)으로 덮은 후 시험관을 끓는 수조에 넣는다. .

5. 20분 후 끓는 수조에서 시험관을 꺼내 흐르는 물에 실온까지 식힙니다.

6. KI 용액(D)과 H2SO4 용액(E)을 각각 2.0ml씩 순서대로 첨가하세요.

7. 시험관을 흔들어 Na2S2O3<으로 적정하여 잔류 Cu++의 양을 측정합니다. /sub> 솔루션(F).

8. 시험(Δt)과 공시험(Δb)의 역가(ml)를 기록하고 적정 차이를 ml(Δ 샘플:Δb)로 계산합니다. −Δt).

*효소 제제를 얼음처럼 차가운 증류수에 녹이고 0.4로 희석합니다. −1.5U/ml, 효소 희석제(G) 포함, 분석 직전.

계산

활동량은 다음 공식을 사용하여 계산할 수 있습니다:

  • 활동량(U/ml) =< /p>

  • Δ샘플×30분×df

    Δ ;포도당×15분

  • =

  • Δ샘플

    Δ포도당

  • ×2.0×df

체중 활성도(U/mg) = (U/ml)×1/C

<테이블 클래스 ="mt10">Δ포도당: 포도당 10mg에 대한 적정 차이(ml)(포도당을 사용하여 적정 차이를 결정) 위 분석조건에서는 효소액 대신 표준용액(5.0mg/ml)을 사용하세요.)df: 희석배수 C: 용해 시 효소 농도(c mg/ml)

참조

1) K.Hiromi, Y. Nitta, C.Numata 및 S.Ono; Biochim.Biophys.Acta, 302, 362(1973).

2) J.Fukumoto; 단백질, 핵산 및 효소, 4, 3(1959).

  • 그림 1. 안정성(분말 형태)

    그림 1. 안정성(분말 형태)

    (건조한 조건에서 보관)

  • 그림 2. 안정성(분말 형태)

    그림 2. 안정성(분말 형태)

    (건조한 조건에서 보관)

  • 그림 3. pH-활성도

    그림 3. pH-활성

    50mM 완충액에서 40~15분 반응: pH2.0, 아세트산나트륨-HCl; pH3.0-6.0,아세테이트;pH6.0-7.0, 인산염

  • 그림 4. 온도 활동

    그림 4. 온도 활동

    50mM 아세테이트 완충액, pH4.5에서 15분간 반응

  • Fig.5.pH-안정성

    Fig.5.pH-안정성

    50mM 완충액으로 25·20시간 처리: pH 3.0-6.0 아세테이트; pH6.0-9.0,인산염;pH9.0-10.0, 붕산염

  • 그림 6. 열 안정성

    그림 6. 열 안정성

    50mM 아세테이트 완충액, pH5.5로 10분간 처리

活性測정법(일본어)

1. 원본

원리

그르코스(還元糖)の生成weightを페-링・레이만・쇼르変법을 사용하여 결정합니다.

2. 정의

下記反応条件下下地30分付応条件下下地30分応条件下地30分単位(U)とsururu.

삼.試薬

  • 1.0% 可溶性澱粉溶液[1.0gの可溶性澱粉 (Merck製)を90mlの蒸留水에 懸濁後,約3分煮沸溶解uru.室温迄冷却後，1.0M酢酸緩衝液， pH4.5を5.0ml添加し，添加し，最終液weightを蒸留water下100ml と suru 〉(사용시계製)
  • 로시르塩아르카리溶液(100g) NaOH及び 365gの酒stone酸溶液(70gのCuSO4・5H 2Oを蒸留水に溶解し，1,000ml 입니다)
  • 30%요드카리액액(300gのKIを蒸留waterに溶解し， 1,000ml 입니다)(褐color瓶中드로保存)
  • 25%硫酸溶液
  • 50mM치오硫酸나트리움溶液〔49.638gの Na2S2O3・5H2O及び4.0gのNa2CO3(안정화剤) を蒸留水に溶解し，4,000mlと suru〉(褐color瓶中د保存し，調製後3~4日放置して使後し )

酵素溶液：酵素標productを予め氷冷た蒸留水下り溶解し，分析直前に10mM酢酸緩衝液 pH4.5에서 0.4 ~1.5U/ml에 도달합니다.

4. 절차

1. 시험관(32φ×200mm)에 기질 용액(A) 4.0ml를 채취하고, 40℃에서 약 5분간 예비가온한다.

2. 효소 용액을 1.0ml 첨가하고 반응을 시작한다.

3.40℃에서 정확하게 15분간 반응시킨 후, 로셸염 알칼리 용액(B) 2.0ml 첨가하여 반응을 정지 하자.

4. 황산구리 용액(C)을 2.0ml 첨가하고, 시험관 상에 40mmφ의 유리구슬을 얹어(증발 방지) 끓는 목욕에서 20 분 동안 끓인다.

5. 흐르는 물에서 실온까지 냉각한다.

6. 요오드칼리 용액 (D) 2.0ml 및 황산 용액 (E) 2.0ml를 이 순서에 첨가한다.

7. 잘 혼합한 후, 티오황산나트륨 용액(F)으로 적정한다. →(반응 적정값)

8.맹검은 기질 용액(A) 4.0ml를 40℃으로 15분간 방치 그 후, 로셸 염 알칼리 용액 (B) 2.0ml를 가하여 혼합하고, 효소 용액 1.0ml를 첨가하여 조제한다. 다음 절차 ④ ~⑦ →(맹검 적정값)

5. 수식

  • U/ml =

  • (맹검 적정치-반응 적정값)×30(분)×희석 배율

    표준 적정값×15(분)

  • =

  • (맹검 적정값 - 반응 적정값)

    표준 적정값

  • ×2.0×희석 배율

U /mg =U/ml×1/C

표준 적정값: 효소 용액 대신 포도당 표준 용액 (5.0 ㎎/㎖)를 사용하여 상기 절차에 따라 조작하고, 포도당 10mg에 상당하는 적정값을 산출한다(내부 표준)
C: 용해시 효소 농도(c mg/ml)

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