대장균에서 고순도의 플라스미드 DNA를 추출하기 위한 키트입니다. 추출한 플라스미드는 시퀀스나 다양한 효소 반응 및 형질전환 등에 직접 사용할 수 있습니다.
본 키트는, 자성 실리카 비드에, 파쇄 용액 중의 플라스미드 DNA를 흡착시켜 회수하는 방법을 원리로 하고 있어, 페놀 등의 유해한 시약에 의한 제단백 조작이나 에탄올 침전 조작이 불필요합니다. 또한 고속 원심분리기로 원심분리 조작을 최소화합니다.
또한 본 킷은 매뉴얼 킷으로서 사용했을 경우, 1 샘플당 ¥66과 코스트 퍼포먼스가 뛰어납니다.
본 키트는 자성 비드 분리용 스탠드를 사용하여 사용할 수 있습니다.

● 저비용

수동 키트로서 샘플당 비용은 단 66엔입니다.

●간편・단시간

자성 실리카 비드에의 플라스미드 DNA의 흡착을 기본 원리로 하고 있어, 간편하게 단시간에 플라스미드 DNA를 추출할 수 있습니다.

● 안전

유해한 페놀/클로로포름 처리가 필요하지 않습니다.

●고순도의 플라스미드 DNA 정제가 가능

본 키트에서 추출한 플라스미드 DNA는 게놈 DNA, RNA, 단백질 등의 불순물을 거의 포함하지 않고 다양한 용도로 사용할 수 있습니다.

1. 추출한 플라스미드의 제한효소 처리

pUC18을 유지하는 JM109 형질전환체의 밤새 배양액 1.2mL로부터, 플라스미드를 본 키트 및 타사 키트에 의해 추출을 실시했습니다. 그 결과, 단백질이나 게놈 DNA, RNA의 혼입이 거의 없고, 타사 키트에 비해 동등 이상의 수량으로 플라스미드를 얻을 수 있었습니다. 또한, 얻어진 플라스미드의 일부를 제한 효소로 절단한 결과, 타사 키트와 같이, 완전히 소화되어 있는 것을 확인할 수 있었습니다.
이와 같이 본 키트를 사용함으로써 대장균 등의 박테리아로부터 고순도의 플라스미드를 추출할 수 있다.

2. 추출한 플라스미드의 시퀀스 해석

2. 추출한 플라스미드의 시퀀스 분석"" />

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본 키트에서 추출한 pUC18을 0.5㎍을 사용하여 ABI PRISM 310 Genetic Analyzer로 시퀀싱하였다. 시퀀싱 프라이머는 M13 Primer P8을 사용하였고 시퀀싱 키트로 dRhodamine Terminator Cycle Sequencing FS Ready Reaction Kit (PE Applied Biosystems)를 사용했습니다.
그 결과, 본 키트에서 추출한 플라스미드는 오토 시퀀서에도 충분히 사용할 수 있는 품질을 유지하고 있는 것을 확인할 수 있었습니다.

1) B. Vogelstein and D. Gillespie, Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 76 : 615-619 (1979)
2) R. Boom et al., J. Clin. Microbiol. , 28 : 495-503(1990)