배양 세포나 조직 등의 생체 샘플로부터 고순도의 Total RNA를 추출하기 위한 키트입니다. 회수한 Total RNA는 주로 RT-PCR 등에 사용할 수 있습니다.
자성 실리카 비드에, 파쇄 용액 중의 Total RNA를 흡착시켜 회수하는 방법을 원리로 하고 있기 때문에, 종래의 AGPC법에 필요했던 페놀 등의 유해한 시약에 의한 제단백 조작이나 에탄올 침전 조작, 고속 회전 에 의한 원심분리 조작이 불필요합니다.
본 키트는 자성 비드 분리용 스탠드를 사용하여 사용할 수 있습니다.

● 다양한 샘플에 대응

배양 세포, 조직, 효모 등에서 고효율로 Total RNA를 추출할 수 있습니다. Total RNA는 주로 rRNA와 mRNA를 포함한다.

●간편・단시간

자성 실리카 비드에 Total RNA의 흡착을 기본 원리로 하고 있어 간편하게 단시간에 Total RNA를 추출할 수 있습니다.

●고순도의 Total RNA 정제가 가능

1. 수율과 순도 검토

인간 세포주 HL60 세포 2×10 ⁶ cells를 샘플로서 본 키트와 일반적인 RNA 추출법인 AGPC법에 의해 Total RNA 추출을 실시했습니다. 그 결과, 본 키트에 의한 추출에 있어서, 수량은 페놀을 이용한 AGPC법과 거의 동등한 결과가 얻어지고, 영동 패턴 및 OD비로부터 단백질이나 DNA 등의 불순물의 혼입이 거의 없고, 고순도의 RNA가 추출 할 수 있었던 것을 알았습니다.

2. 추출 RNA의 RT-PCR

인간 세포주 HeLa 세포 2×10 ⁶ cells로부터 추출한 Total RNA 중 1㎍을 사용하여 Transferrin receptor mRNA를 타겟(2,115bp)으로서 RT-PCR을 실시하였다. 그 결과, 역전사반응을 실시한 경우에만 타겟의 증폭이 보였고, 비교적 발현량이 낮은 것으로 알려진 Transferrin receptor 유전자의 발현을 확인할 수 있었다.

3. 쥐 조직에서 추출

래트의 각 조직에서 본 키트를 이용하여 Total RNA의 추출을 실시했습니다. 추출은 50 ~ 100mg의 조직을 액체 질소로 동결시킨 후, 해머로 분쇄하고, 빙냉한 용해·흡착액(2-ME 함유) 750~900μL 중에서 페슬을 사용하여 충분히 균질화하고, 그 위에 청을 이용하여 추출을 실시하였다. 그 결과, 조직의 균질화 상청액으로부터 본 키트를 이용하여 고품질의 RNA를 추출할 수 있는 것을 알 수 있었다.

1) B. Vogelstein and D. Gillespie, Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 76 : 615-619 (1979)
2) R. Boom et al., J. Clin. Microbiol. , 28 : 495-503(1990)