자성 실리카 비드를 이용한 혈액, 배양 세포, 조직 등으로부터
고순도 게놈 DNA를 추출하기 위한 키트입니다.
이 키트는 단백질 변성제 (카오 트로픽 제)에서 자성
실리카 비드에 파쇄 용액 중의 게놈 DNA를 흡착시켜 회수
하는 방법을 원리로 하기 때문에 페놀 등의 유해한
시약에 의한 제단백질 조작이나 에탄올 침전 조작·고회전
원심 분리 작업이 필요 없으며 간편하게 추출 할 수 있습니다.
합니다.
회수된 게놈 DNA는 주로 PCR과 같은 효소 반응에 직접 사용될 수 있다.
본 키트는 자성 비드 분리용 스탠드를 이용하여 전혈로부터 직접 DNA 추출을 할 수 있으므로, 백혈구의 분리 조작은 불필요하고 간편합니다.

● 간편하게 단시간에 추출

자성 실리카 비드에의 게놈 DNA의 흡착을 기본 원리로 하고 있어 간편하게 단시간에 게놈 DNA를 추출할 수 있습니다.

● 안전

유해한 페놀/클로로포름 처리가 필요하지 않습니다.

●고순도의 게놈 DNA 정제가 가능 추출된 게놈 DNA는 다양한 실험에 직접 사용할 수 있습니다.

● 다양한 샘플에 대응

전혈, 동물 배양 세포, 동물 조직 및 마우스 테일 등에서 직접 게놈 DNA를 추출할 수 있습니다.

1. 수율과 순도 검토

전혈 100μL로부터 본 키트와 타사 키트를 이용하여 게놈 DNA 추출을 실시하였다. 본 키트에 의한 추출에 있어서는 타사 키트와 거의 동등한 수율이 얻어졌습니다. 또, 순도에 있어서는, A사나 C사의 키트에서는 단백질이나 RNA등의 불순물의 혼입이 인정되었습니다만, 본 키트에서는 인정되지 않았습니다. 본 키트를 사용함으로써 전혈 등의 생체 시료로부터 고순도의 게놈 DNA를 추출할 수 있었다.

2. 추출 DNA의 PCR 예

10명의 혈연관계가 없는 건강한 사람으로부터 채취한 전혈 100μl로부터 본 키트를 이용하여 게놈 DNA를 추출하였다. 그 결과 A260nm/280nm가 1.83~1.84인 고순도의 게놈 DNA를 약 1.4~2.2μg 추출할 수 있었습니다.
다음으로, 게놈 DNA 추출 후, 전량의 1/20을 사용하여 Taq DNA Polymerase에 의해 싱글 로커스 VNTR 부위인 MCT118을 타겟으로 PCR 해석을 실시하였다. MCT118은 16개 염기의 반복 서열로 구성되며, 이 반복 수를 측정하여 개인 식별을 수행할 수 있습니다. 그 결과, 각 개인에 특이적인 밴드를 검출할 수 있었습니다.

3. 쥐 조직으로부터의 게놈 DNA의 추출 및 PCR 해석 예

-80℃ 동결 절편 5mg을 본 키트의 용해·흡착액 중에서 균질화한 후, 그 원심 상청으로부터, 본 키트를 이용하여 게놈 DNA의 추출을 실시하였다. 그 결과, 각각 2.3㎍, 1.6㎍의 게놈 DNA를 얻을 수 있었다. 260nm/280nm는 각각 1.86, 1.83이었습니다. 또한 추출한 DNA를 이용하여 Taq DNA Polymerase에 의해 TNF-α 유전자(482bp, 1226bp)를 증폭한 결과 양호한 결과를 얻을 수 있었습니다.

1) B. Vogelstein and D. Gillespie, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76 : 615-619 (1979)
2) R. Boom et al., J. Clin. Microbiol. , 28 : 495-503(1990)