장내 세균 유전자 검출 키트 - 고속 형광 검출 -은 식중독 원인균으로 알려진 살모넬라, 장관 출혈성 대장균 (EHEC), 이질균의 유전자를 멀티플렉스 PCR로 증폭하고, EvaGreen ^® 형광 색소에 의한 융해 곡선 해석 에서 검출하는 키트입니다.
최단 1시간에 해석이 완료되므로 신속한 음성 판정을 실시할 수 있습니다.

●보다 신속, 반응 시간을 대폭 단축 동양 방 독자 기술에 의해, 높은 감도와 특이성을 유지하면서, 해석 시간의 단축이 가능하게 되었습니다. 장치에 따라 PCR, 융해 곡선 해석 시간이 다릅니다만, 50분~1시간 20분 정도로 해석이 종료해, 신속하게 음성 판정을 실시할 수 있습니다.


●간편 폐사 독자 기술로 핵산 정제 불필요한 PCR을 실현했습니다. 번거로운 DNA 정제는 필요없고, 검변 검체를 물에 현탁하고, 가열 처리와 원심분리를 실시한 것을 PCR에 사용합니다.
또, 본 제품은 멀티플렉스 PCR에 의해 3균종을 하나의 반응으로 검출할 수 있기 때문에, 리얼타임 PCR장치에 반응액을 세트하는 것만으로, 튜브를 열지 않고, 1튜브로 3균종을 검출하는 것이 가능 가능합니다.

● 다양한 실시간 PCR 장치에 대응
Bio-Rad CFX96 Touch ^TM Deep Well 실시간 PCR 장치는 1시간 내에 분석이 가능합니다. 그 외의 장치에 대해서도, 장치에 적합한 사이클 조건을 준비하고 있습니다.

● 필요한 시약을 모두 첨부
융해 곡선 해석에 사용하는 인터컬레이션 형광 색소 EvaGreen ^® 도 포함되어 있으므로, 본 제품에 포함된 모든 시약을 혼합하고, 대변 열처리액을 첨가하는 것만으로 해석이 가능합니다.
※동양방은 미국 Biotium Inc.와의 라이센스 계약하에 ^EvaGreen® 을 키트에 사용하고 있습니다. 고객까지의 라이센스 계약은 필요하지 않습니다.

● 캐리오버 오염의 위험을 감소 위양성의 발생 원인으로 캐리오버 오염이 있습니다. 본 제품은 PCR에서 형광 검출까지 튜브를 열지 않고 1 튜브로 검출할 수 있기 때문에 캐리오버의 위험이 줄어듭니다. 또한 Uracil-DNA Glycosylase를 포함하기 때문에 10 ³ ~ 10 ⁴ 카피/반응 정도의 오염된 PCR 증폭 산물을 분해하여 위양성을 방지할 수 있습니다.

●검변 검체의 스크리닝에 이용 가능 본 제품은 50 검체로부터 풀링한 대변 검체의 장내 세균을 검출할 수 있는 감도를 가지고 있기 때문에 검변 검사의 스크리닝에 사용할 수 있습니다. 스크리닝을 실시하는 이점으로는 다음의 3점을 들 수 있습니다.

1) 검사 당일에 90~95%의 음성 검체를 판정할 수 있습니다.
스크리닝은 몇 시간 안에 완료할 수 있으므로 검사 당일에 90~95%의 음성을 판정할 수 있습니다. 양성이 된 풀에 포함되는 검체는, 개별적으로 배양법으로 검사하여 양성을 판정합니다.

2) 도말 배양의 검체수를 10분의 1 이하로 저감할 수 있습니다.
90~95% 정도의 음성 검체를 배제할 수 있으므로, 배양법의 검체수를 전체 검체수의 약 10분의 1 이하로 저감할 수 있습니다.

3) 판정이 간편합니다.
피크의 검출에 의해 판정을 실시하기 때문에, 콜로니의 색이나 형상에 의한 판정에 비해 판정이 간편합니다.

1. 검출 감도 확인 살모넬라 게놈 DNA, 장관 출혈성 대장균 게놈 DNA, 이질균 게놈 DNA를 각각 10 카피/반응이 되도록 음성 대변의 열처리액에 첨가한 것을 샘플로 하여 본 제품을 이용하여 PCR 를 실시한 후, 융해 곡선 해석에 의해 검출을 실시했습니다. 분석에는 Bio-Rad CFX96 Touch ^TM Deep Well 실시간 분석 시스템을 사용했습니다. 그 결과, 두 유전자 모두 10개의 복사본에서 명확한 피크가 나타났다. 또한 음성 대변의 경우 내부 표준(인터널 컨트롤)의 피크만 검출되어 음성으로 판정되었습니다.