소 유래 탈인산화 효소
Calf Intestine Alkaline Phosphatase [CAP-101]
가격표
용도
● 클로닝 벡터의 셀프 라이 게이션 방지
설명
본 효소는 분자량 100,000, 등전점(PI)=5.7, 최적 pH 10.0~10.5이며, DNA 및 RNA의 인산 모노에스테르 결합을 가수분해하는 활성을 가지고 있습니다.
디인산에스테르 결합이나 트리인산 결합에는 작용하지 않지만, ATP 등의 피로인산 결합에도 약한 가수분해 작용을 나타냅니다. 억제제로는 Cu 2+ , Ag + , Hg 2+ , 및 EDTA 등이 알려져 있습니다.
본 효소는 라이게이션 반응에 DNA 단편의 5'말단의 인산기가 필요함을 이용하고, 제한효소 처리한 벡터를 탈인산화 처리하는 것에 의한 셀프라이게이션의 방지 등에 이용됩니다.
또한, 5'말단 표지 프로브를 제작할 때, 미리 프로브의 5'단의 인산기를 제거함으로써, Kinase와 [γ -32P ]ATP를 이용한 표지의 효율 향상 등에도 사용된다 합니다.
특징
●간편
65℃, 30min.의 열처리로 실활시킬 수 있습니다.
원리
실시예
BAP와 CIAP의 열 안정의 차이
-
BAP와 CIAP의 열 안정성 차이"" />
BAP와 CIAP의 열 안정성을 비교했습니다.
BAP는 CIAP에 비해 매우 열 안정성이 높은 것으로 나타났습니다. 따라서 BAP 처리 DNA 샘플을 Ligation 반응에 사용하는 경우에는 반드시 페놀 처리 등의 정제가 필요하다는 것이 시사되었습니다.
한편, CIAP는 65℃, 30분간의 열처리로 거의 실활시킬 수 있었다.
기타 실시예
참고 문헌
1) HN Ferunley, The Enzymes (3rd Ed.) , 4 : 417-447(1971)
2) RK Morton, Biochem. J. , 61 : 232-240 (1955)
3) F. Dray et al., Methods of Enzymatic Analysis , 9 : 348-362(1986)
4) P. Rathman and BB Saxtena, Methods of Enzymatic Analysis , 9 : 396-404(1986)
제품 내용
Calf Intestine Alkaline Phosphatase(1-3U/μL)
10×Buffer〔CAP-1B〕모양:
30mM Triethanolamin (pH7.6)
1mM MgCl 2
50% Glycerol
10×Buffer 〔Code No. CAP-1B〕 조성:
500mM Tris-HCl (pH8.0)
활동 정의:
37℃, pH 10.2에 있어서, 1분에 1μmole의 p-Nitorophenyl phosphate를 가수분해하는 효소량을 1U로 합니다.
기원:
Calf intestine
순도:
본 효소 5U와 1㎍의 λDNA/ HindⅢ 분해물을 37℃에서 16시간 반응시켜도 DNA의 전기영동 패턴에는 변화가 없다.
본 효소 2U와 2μg의 tRNA를 37℃에서 16시간 반응시켜도 tRNA의 전기영동 패턴은 변화하지 않습니다.
- 기본 반응 조건
<5'돌출 말단>
멸균 증류수 XμL
DNA 5-20pmoles 5' 끝
10×버퍼 20μL
Alkaline Phosphatase 10U
Total Volume 200μL
↓
37℃, 30min.
<평활 말단, 3'돌출 말단>
멸균 증류수 XμL
DNA 5-20pmoles 5' 끝
10×버퍼 20μL
Alkaline Phosphatase 30U
Total Volume 200μL
↓
37℃, 15min.
50℃, 15min.
- 원포인트 조언
반응 후의 샘플의 정제 본 효소는 65℃, 30min.의 가열 처리에 의해 거의 실활합니다만, 완전을 기하는 경우에는, 페놀 처리를 실시하거나, 키트에 의한 정제를 추천합니다.
키트는 MagExtractor TM -PCR & Gel Clean up- 등을 권장합니다.
English Page
관련상품
Calf Intestine Alkaline Phosphatase [CAP-101]<br>부품 단품
품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
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품명 10× Reaction Buffer for CIAP | Code No.CAP-1B | 포장 1mL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
제품 내용
Calf Intestine Alkaline Phosphatase(1-3U/μL)
10×Buffer〔CAP-1B〕모양:
30mM Triethanolamin (pH7.6)
1mM MgCl 2
50% Glycerol
10×Buffer 〔Code No. CAP-1B〕 조성:
500mM Tris-HCl (pH8.0)
활동 정의:
37℃, pH 10.2에 있어서, 1분에 1μmole의 p-Nitorophenyl phosphate를 가수분해하는 효소량을 1U로 합니다.
기원:
Calf intestine
순도:
본 효소 5U와 1㎍의 λDNA/ HindⅢ 분해물을 37℃에서 16시간 반응시켜도 DNA의 전기영동 패턴에는 변화가 없다.
본 효소 2U와 2μg의 tRNA를 37℃에서 16시간 반응시켜도 tRNA의 전기영동 패턴은 변화하지 않습니다.
- 기본 반응 조건
<5'돌출 말단>
멸균 증류수 XμL
DNA 5-20pmoles 5' 끝
10×버퍼 20μL
Alkaline Phosphatase 10U
Total Volume 200μL
↓
37℃, 30min.
<평활 말단, 3'돌출 말단>
멸균 증류수 XμL
DNA 5-20pmoles 5' 끝
10×버퍼 20μL
Alkaline Phosphatase 30U
Total Volume 200μL
↓
37℃, 15min.
50℃, 15min.
- 원포인트 조언
반응 후의 샘플의 정제 본 효소는 65℃, 30min.의 가열 처리에 의해 거의 실활합니다만, 완전을 기하는 경우에는, 페놀 처리를 실시하거나, 키트에 의한 정제를 추천합니다.
키트는 MagExtractor TM -PCR & Gel Clean up- 등을 권장합니다.
English Page
※ 법규제에 대해서
독독물 및 극물 단속법 [의약용 외독물]
극독물 및 극물 단속법 [의약용 외극물]
위험소방법[위험물]
신구입시에 신청서의 제출이 필요한 제품
없음상기 법령이나 신청서의 제출에 해당하지 않는 제품
국가국민보호법[독소]
세트카르타헤나 법 (유전자 재조합 생물 등의 사용 등의 규제에 의한
생물의 다양성 확보에 관한 법률)
PPRTR법(화학물질 배출 파악 관리 촉진법) [신고 의무 물질]
노동노동안전보건법[통지 또는 표시의무물질]