T4 DNA ligase를 주체로 한 고효율의 1액형의 라이게이션 시약입니다. 다양한 말단을 가진 DNA 단편의 연결 반응에 널리 사용할 수 있습니다. 종래품에 개량을 더해 한층 더 다양한 용도로 간편하게 사용하실 수 있게 되었습니다.
본 제품은 친숙한 Ligation high를 더욱 사용하기 쉽게 개량한 고효율의 1액 타입의 라이게이션 시약입니다. DNA 단편과 혼합하여 단시간 반응시키는 것만으로 고효율의 연결 반응을 할 수 있습니다. 돌출 말단, 평활 말단 및 TA 클로닝에 폭넓게 사용할 수 있습니다.

● 고효율

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특히 TA 클로닝의 효율성이 크게 향상되었습니다. 아래 그림은 각 회사 키트와 TA 복제 효율의 비교를 보여줍니다.

●-20℃ 보존으로 동결하지 않습니다

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냉동고에서 꺼내 즉시 사용할 수 있습니다. 오른쪽 사진은 -20 ° C 보관에서 시약의 상태를 보여줍니다.
[종래품:Ligation high〈녹색〉, 본제품:Ligation high Ver.2〈파랑〉]

●편리한 1액 타입

사용법은, 종래품과 같이, DNA 단편과 혼합하는 것만으로 간단합니다.

1. DNA 말단의 형상과 라이게이션 효율과의 관계

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16℃ 반응에서의 DNA 단편(0.5kb)의 클로닝 효율을 말단 형상별로 비교하였다. 그 결과, 돌출 말단 라이게이션에서는 약 5분만에 거의 라이게이션 반응이 완료된 것을 알 수 있었다. 또한 평활 말단 및 TA 클로닝에서도 30분에 약 70~80%의 반응이 완료되는 것을 알 수 있었다. 또한, 평활 말단 클로닝, 및 TA 클로닝에 있어서는, 1시간을 넘어 2시간까지 서서히 효율이 증가하는 것도 알고 있고, 클로닝 효율이 낮은 경우는, 반응 시간을 2시간까지 연장함으로써, 또한 효율을 향상시킬 수 있습니다.

2. 미정제 PCR 산물을 이용한 TA 클로닝

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T 벡터 (50 ng, 25 fmol)와 양호한 증폭을 나타내는 정제되지 않은 PCR 산물 (Taq DNA polymerase로 증폭 된 0.5kb 단편)을 다양한 비율로 혼합 한 DNA 용액 7.5 μL에 Ligation high Ver.2 7.5 μL를 첨가하고 16℃에서 30분 동안 반응하였다. 그 후, 반응액 10μL를 이용하여 E. coli DH5α 컴피텐트 셀 100μL를 형질전환하고, LB/Amp(XGal) 플레이트에서 배양 후, 콜로니수를 카운트하였다. 그 결과, 가능한 한 PCR 반응액의 반입량을 적게 하는 것이 양호한 결과를 얻을 수 있는 것을 알 수 있었습니다.
또, 정제한 DNA 단편을 이용하는 쪽이 높은 효율을 얻을 수 있는 것을 알고 있어, 효율이 낮은 경우는, 정제 PCR 산물을 이용하는 쪽이 양호한 결과를 기대할 수 있습니다.

1) RL Hawkins et al., Current Microbiol. , 38 : 335-341(1999)