본 제품은 단시간에 높은 형질전환 효율을 얻을 수 있도록 준비된 서브클로닝 등급의 대장균 DH5α 유능한 셀입니다.
기존의 컴피턴트 셀에서는 형질전환에 1.5~2시간이 걸렸습니다만, 본 제품에서는 10분 이하의 프로토콜로 확실하게 형질전환체를 얻을 수 있습니다. 본 프로토콜에서는 암피실린의 경우 SOC 배지를 이용한 것에 비해 약 1/3~1/10(3×10 ⁷ 이상)의 효율을 얻을 수 있습니다. 카나마이신의 경우도 약 1/3~1/10 정도입니다. 그러나 카나마이신의 경우 대장균이 약물 농도에 민감하기 때문에 약물 농도에주의를 기울여야합니다.


유전자형 ●DH5α
deo R, sup E44, hsd R17(rk-, mk+),
pho A, rec A1, end A1, gyr A96, thi-1 ,
rel A1, D ( lac ZYA- arg F) U169,
f80d lac ZDM15, F ^- , l ^-
※DH5α는 dam ⁺ 입니다. GATC 부위의 아데닌은 메틸화됩니다.

●간편・신속하게 형질전환 가능

약 10분 후에 형질전환이 완료됩니다.
pBR322를 이용하여 형질전환을 실시하고, 암피실린으로 선택했을 경우, ≥3x10 ⁷ transformants /μg·pBR322의 효율을 얻을 수 있습니다.

●보존 안정성 양호

-80℃에서 적어도 3개월은 안정하다. 또한 장기간 보존되는 경우에는 액체 질소 중에서의 보존을 권장합니다.

● 높은 비용 성능

20개들이입니다.

1. 다양한 항생제를 사용한 경우의 형질전환 효율

pBR322 (Ampicillin ^r , Tetracycline ^r ), pAK119M (Kanamycin ^r ), pAT5 (Chloramphenicol ^r )의 각 플라스미드 10pg / 5μL TE buffer를 사용하여 기본 반응 조건으로 형질 전환을 실시하여 각 항생제로 효율의 평가를 실시했습니다. 동시에, 본 프로토콜에 SOC 배지에서의 배양 단계(37℃, 30분간 또는 60분간)를 추가한 프로토콜에서도 평가를 실시하였다. 그 결과, 암피실린 및 카나마이신으로 선택했을 경우에는, 단 10분간의 본 프로토콜로 10 ⁸ transformants /μg·plasmid 이상의 효율을 얻을 수 있었습니다. 한편, 테트라사이클린 및 클로람페니콜로 선택했을 경우에는, 히트 쇼크 후에 SOC 배지에서의 배양 단계를 추가함으로써, 10 ⁸ 이상의 효율을 얻을 수 있는 것을 알 수 있었다.

또한, 본 실험에서는, LB 한천 배지의 각 항생물질은 하기의 농도로 실시했습니다.
· 암피실린 (Amp) : 50μg / mL
· 카나마이신 (Kan) : 10μg / mL
· 테트라 사이클린 (Tet) : 20μg / mL
· 클로람페니콜 (Cm) : 100μg / mL

2. 플라스미드 DNA의 액량이 형질 전환 효율에 미치는 영향

pBR322 (Ampicillin ^r ) 5pg / 5 ~ 50μL TE buffer를 사용하여 기본 반응 조건에서 형질 전환을 실시하여 각 액량에서의 형질 전환 효율을 평가했습니다. 그 결과, 형질전환에 제공하는 플라스미드 DNA의 액량이, 유능한 셀 용량의 30%를 초과하면, 효율이 저하 경향에 있는 것을 알 수 있습니다.

3. 플라스미드 DNA량의 형질전환 효율에의 영향

pBR322 (Ampicillin ^r ) 1pg ~ 100ng / 5μL TE buffer를 사용하여 기본 반응 조건에서 형질 전환을 실시하여 각 DNA량에서의 형질 전환 효율을 평가했습니다. 그 결과, 형질전환에 제공하는 플라스미드 DNA량이, 컴피텐트 셀 100μL에 대해 10ng를 넘으면, 효율이 저하 경향에 있는 것을 알았습니다.

1)M. Mandel and Higa, A., J. Mol.Biol. , 53 : 159-162(1970)
2)M. Dagert and SD Ehrlich, Gene , 6 : 23-28(1974)
3) SR Kushner, in Genetic Engineering (HW Boyer, and S. Nicosia, Eds.),17-23, Elsevier/North Holland, Amsterdam(1978)
4) D. Hanahan, J. Mol. Biol. , 166 : 557-580 (1983)
5)H. Inoue, H. Nojima and H.Okayama, Gene , 96 : 23-28(1990)