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Competent high [DNA-900F]
가격표
유능한 셀
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 Competent high JM109 | Code No.DNA-900F | 포장 0.1mL×10개 | 저장 온도 액체 질소 | 설명서 사양
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SDS | 법규제 ※ 없음 |
| 품명 Competent high DH5 | Code No.DNA-901F | 포장 0.1mL×10개 | 저장 온도 액체 질소 | 설명서 사양
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SDS | 법규제 ※ 없음 |
| 품명 Competent high DH5α | Code No.DNA-903F | 포장 0.1mL×10개 | 저장 온도 액체 질소 | 설명서 사양
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SDS | 법규제 ※ 없음 |
용도
●형질전환
(pBR322 계 벡터의 숙주로서)
pBR322를 비롯하여 다양한 플라스미드의 숙주로 널리 사용할 수 있습니다.
(청백 판정용 벡터의 숙주로서)
pUC, M13계 벡터, pBluescript Ⅱ 등, lac Zα를 갖는 벡터를 이용하여 형질전환을 행함으로써, β갈락토시다아제의 활성 회복(α상보성)에 의해 IPTG와 X-gal을 첨가한 배지 에서 청백 판정을 할 수 있습니다. 삽입 단편을 포함하지 않는 플라스미드에 의한 형질전환체는 파란 콜로니가 되는 반면, 삽입 단편을 포함하는 플라스미드에 의한 형질전환체는 흰 콜로니가 되기 때문에, 목적의 콜로니를 용이하게 구별할 수 있습니다.
(단일 가닥 DNA의 준비)
단일 가닥 DNA의 준비에 필요한 F'인자를 보유한다.
(lac, tac 프로모터에 의한 단백질 발현)
외래 유전자 산물은, 숙주의 증식에 악영향을 미칠 우려가 있기 때문에, 재조합체가 충분히 증식할 때까지는 발현을 억제해 두고, 증식이 진행된 단계에서 발현시킨다(IPTG에 의한 유도) 쪽이 좋은 경우 있습니다.
JM109는 lacIq 돌연변이로 인해 lac 리프레서를 과발현합니다. lac 리프레서는 lac,tac 프로모터에 부의 제어를 실시하여 목적 단백질의 발현을 억제합니다. 목적 단백질의 발현을 유도할 때, IPTG를 배지에 첨가하여 lac 리프레서의 작용을 억제함으로써 목적 단백질의 발현을 유도할 수 있다.
(cDNA 라이브러리 구축)
본 제품은 형질전환 효율이 높고, cDNA 라이브러리의 구축에 적합합니다.
설명
독자적인 제법으로 조제된 고효율의 형질전환용의 대장균 컴피텐트 셀입니다. JM109, DH5 및 DH5α에서 선택하실 수 있습니다. 
재조합 실험에서 유능한 세포를 이용한 대장균으로의 유전자 도입은 필수 기술이며, 안정적이고 높은 형질전환 효율이 요구된다. Mandel과 Higa 등이 염화칼슘으로 대장균을 처리하면 대장균의 세포막 구조가 변화하여 DNA를 쉽게 투과할 수 있는 상태, 즉 유능한 상태로 할 수 있음을 발견하고 이후 현재까지 조제법에 대해서는 여러가지 개량이 이루어져 왔습니다. 폐사에서는 그 후도 개량을 거듭해, 한층 더 효율이 뛰어난 컴피텐트 셀의 조제법을 개발했습니다.
유전자형 ●JM109
e14-( mcr A-), rec A1, sup E44, end A1, hsd R17(r k - , m k + ), gyr A96, rel A1, thi-1 , D( lac - pro AB), F' [ tra D36, pro AB, lac I q , lac ZDM15]
●DH5
deo R, sup E44, hsd R17(r k - , m k + ), rec A1, end A1, gyr A96, thi-1 , rel A1, F - , l -
●DH5a
deo R, sup E44, hsd R17(r k - , m k + ), pho A, rec A1, end A1, gyr A96, thi-1 , rel A1, D( lac ZYA- arg F)U169, f80d lac ZDM15 , F - , l -
※JM109, DH5, DH5α는 모두 dam + 입니다. 이러한 유능한 세포를 사용하면 GATC 부위의 아데닌이 메틸화됩니다.
형질전환 효율
| JM109 | DH5 | DH5α | |
| 형질전환 효율 | ≥1×10 8 | ≥3×10 8 | ≥3×10 8 |
특징
● 즉시 형질 전환
SOC 배지가 첨부되어 있어 즉시 형질전환이 가능합니다.
원리
실시예
기타 실시예
참고 문헌
1)M. Mandel and Higa, A., J. Mol.Biol. , 53 : 159-162(1970)
2)M. Dagert and SD Ehrlich, Gene , 6 : 23-28(1974)
3) SR Kushner, in Genetic Engineering (HW Boyer, and S. Nicosia, Eds.),17-23, Elsevier/North Holland, Amsterdam(1978)
4) D. Hanahan, J. Mol. Biol. , 166 : 557-580 (1983)
5)H. Inoue, H. Nojima and H.Okayama, Gene , 96 : 23-28(1990)
제품 사용 문헌
1) T. Igarashi et al, ASBMB , 271(47) : 29521-29524(. 1996)
2)K. Ohsawa et al., AnalyticalSciences, . 24(1) : 167-172.(2008)
제품 내용
Competent Cell * 0.1mL×10개
SOC 배지 ** 1mL×10개 ※Positive Control Plasmid는 포함되어 있지 않습니다.
* 각 역량에 따라 튜브 캡의 색상을 변경하고 있습니다.
레드···JM109
노랑・・・DH5
녹색・・・DH5α
**Mg, Glucose를 함유합니다.순도 형질 전환하지 않은 본 제품을 암피실린 함유 LB 플레이트에 파종해도 콜로니는 출현하지 않습니다.
- 주의사항
전기 천공에는 사용할 수 없습니다.
- 기본 반응 조건
본 제품(0.1mL)을 녹여 Falcon 튜브(2059)로 옮깁니다.
↓
add:
DNA 1pg-10ng
얼음, 30 분.
42 ℃, 30 초.
얼음, 2 분.
↓
add:
SOC 배지 900 μl
37℃, 1hr. 진탕 배양
↓
플레이트에 적당량을 파종
37℃, 밤새 배양
- 비고
<실험시의 균수의 기준>
10D660=1×10 9 cells/mL
- 원포인트 조언
● 형질전환에 사용하는 플라스미드의 용량에 대해 유능한 셀 용량의 25% 이상의 DNA 용액을 첨가하면 효율이 반감됩니다. 또, 라이게이션 반응 후의 용액을 그대로 형질전환에 이용하는 경우는, 컴피텐트 셀의 액량의 10%(v/v) 이하로 실시해 주세요.
● 형질전환에 사용하는 플라스미드의 크기에 대해 플라스미드의 크기가 7.5kb를 넘으면 크기가 커짐에 따라 효율이 저하됩니다. pBR322(4361bp)의 형질전환 효율에 대해 10kb에서는 약 50%, 15kb에서는 약 20%로 저하됩니다. 또한, 플라스미드의 크기가 10kb 이상인 경우, 형질전환할 수 있어도, 대장균에서의 복제 중에 결실이 일어날 수 있습니다.
●형질전환에 사용하는 플라스미드량에 대하여 형질전환에 사용하는 플라스미드의 양은 0.1pg~10ng의 범위를 추천합니다. 10ng 이상에서는 형질전환 효율이 저하됩니다.
● 형질전환에 사용하는 역량셀의 용량에 대하여 형질전환에 사용하는 역량셀은 50~200μL 사이에서는 효율에 변화가 없는 것을 확인하고 있습니다. 10μL에서는 효율이 반감하고 400μL에서는 배가 됩니다.
관련상품
라이게이션 시약
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 Ligation high | Code No.LGK-101 | 포장 375μL×2개 | 저장 온도 | 설명서 사양
|
SDS | 법규제 ※ -20℃ |
라이게이션 시약
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 Ligation high Ver.2 | Code No.LGK-201 | 포장 750μL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양
|
SDS | 법규제 ※ -20℃ |
유능한 셀
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 Competent Quick DH5α | Code No.DNA-913F | 포장 0.1mL×20개 | 저장 온도 | 설명서 사양
|
SDS | 법규제 ※ -80℃, 액체 질소 |
제품 내용
Competent Cell * 0.1mL×10개
SOC 배지 ** 1mL×10개 ※Positive Control Plasmid는 포함되어 있지 않습니다.
* 각 역량에 따라 튜브 캡의 색상을 변경하고 있습니다.
레드···JM109
노랑・・・DH5
녹색・・・DH5α
**Mg, Glucose를 함유합니다.순도 형질 전환하지 않은 본 제품을 암피실린 함유 LB 플레이트에 파종해도 콜로니는 출현하지 않습니다.
- 주의사항
전기 천공에는 사용할 수 없습니다.
- 기본 반응 조건
본 제품(0.1mL)을 녹여 Falcon 튜브(2059)로 옮깁니다.
↓
add:
DNA 1pg-10ng
얼음, 30 분.
42 ℃, 30 초.
얼음, 2 분.
↓
add:
SOC 배지 900 μl
37℃, 1hr. 진탕 배양
↓
플레이트에 적당량을 파종
37℃, 밤새 배양
- 비고
<실험시의 균수의 기준>
10D660=1×10 9 cells/mL
- 원포인트 조언
● 형질전환에 사용하는 플라스미드의 용량에 대해 유능한 셀 용량의 25% 이상의 DNA 용액을 첨가하면 효율이 반감됩니다. 또, 라이게이션 반응 후의 용액을 그대로 형질전환에 이용하는 경우는, 컴피텐트 셀의 액량의 10%(v/v) 이하로 실시해 주세요.
● 형질전환에 사용하는 플라스미드의 크기에 대해 플라스미드의 크기가 7.5kb를 넘으면 크기가 커짐에 따라 효율이 저하됩니다. pBR322(4361bp)의 형질전환 효율에 대해 10kb에서는 약 50%, 15kb에서는 약 20%로 저하됩니다. 또한, 플라스미드의 크기가 10kb 이상인 경우, 형질전환할 수 있어도, 대장균에서의 복제 중에 결실이 일어날 수 있습니다.
●형질전환에 사용하는 플라스미드량에 대하여 형질전환에 사용하는 플라스미드의 양은 0.1pg~10ng의 범위를 추천합니다. 10ng 이상에서는 형질전환 효율이 저하됩니다.
● 형질전환에 사용하는 역량셀의 용량에 대하여 형질전환에 사용하는 역량셀은 50~200μL 사이에서는 효율에 변화가 없는 것을 확인하고 있습니다. 10μL에서는 효율이 반감하고 400μL에서는 배가 됩니다.
※ 법규제에 대해서
독독물 및 극물 단속법 [의약용 외독물]
극독물 및 극물 단속법 [의약용 외극물]
위험소방법[위험물]
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