본 제품은 rTth DNA Polymerase를 사용한 1 효소·1-step계의 RT-PCR 키트입니다. 핫 스타트에도 대응해, 보다 고감도의 검출이 가능하게 되었습니다.
Tth DNA polymerase는 Mn ²⁺ 존재 하에서 역전사 활성을 나타내는 독특한 효소이며, 본 효소를 사용함으로써 동일한 튜브 내에서 cDNA 합성 반응과 PCR을 연속적으로 실시할 수 있어 다양한 용도에 사용하실 수 있습니다.

1. 당사 기존품과의 감도 비교

인간 G3PDH mRNA ^* 와 프라이머 세트를 사용하여 약 450bp의 영역을 표적으로 하는 RT-PCR을 수행하였다.
RT-PCR Quick Master Mix는 당사 기존 제품에 비해 2자리 이상의 고감도를 보였습니다.

B: 공백 반응

【샘플】인간 G3PDH mRNA ^* (10 ⁶ ~ 10 ² 카피/50 μl 반응계)
* in vivo transcription에서 준비했습니다.

【프라이머】
Primer(F): 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3' (20mer)
Primer(R): 5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3' (20mer)

【사이클 조건】
90℃ 0:30 →60℃ 30:00 →94℃ 1:00
→ (94℃ 0:30 → 60℃ 0:30 → 72℃ 1:00) x 40 사이클
→72℃ 1:00

2. mRNA를 이용한 cdc2 유전자의 검출

인간 배양 세포 유래 mRNA(5ng, 0.5ng)를 주형으로 하고, 인간 cdc2의 ORF 전장(약 900bp)을 타겟으로 한 RT-PCR을 실시했습니다.
cdc2는 세포주기와 관련된 단백질을 암호화합니다.
그 결과, 당사 종래품에서는 검출할 수 없었던 타겟이, RT-PCR Quick Master Mix에 의한 반응에서는 양호한 증폭을 나타내는 것을 알 수 있었습니다.

【프라이머】
Cdc2-F : 5'-CCATACCATTGACTAACTATGGAAGAT-3' (27mer)
Cdc2-R : 5'-GTCAGAAAGCTACATCTTCTTAATCTG -3' (27mer)

【사이클 조건】
90℃ 0:30 →60℃ 30:00 →94℃ 1:00
→(94℃ 0:30 → 60℃ 0:30 → 72℃ 1:00) x 40 사이클
→72℃ 1:00

1) TW Myers and DH Gelfand, Biochem. , 30 : 7661-7666 (1991)