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Mg별첨 타입
| Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|
| Code No.TAP-201 | 포장 250U×1개 | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
Mg 함유 타입
| Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|
| Code No.TAP-211 | 포장 250U×1개 | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
용도
●PCR
설명
본 효소는 Thermus aquaticus YT-1로부터 클로닝된 Taq DNA polymerase의 유전자를 대장균을 이용하여 재조합 발현시켜 조제한 것으로, 천연의 것과 동일한 성질을 나타냅니다.
고순도화하고 있기 때문에 특이성이 우수합니다.
특징
●2타입에서 선택 가능 실험의 목적에 맞추어, 반응 버퍼를 Mg별첨 타입과 Mg 함유 타입으로부터 선택 가능합니다.
원리
실시예
게놈 DNA를 이용한 PCR 예
Human 게놈 DNA(50ng)를 주형으로, Primer 20pmoles, 효소 1.25U의 조건을 이용하여 50μl의 반응계에서 증폭을 실시했습니다. Mg2+와 dNTPs의 종농도는 각각 1.5mM과 0.2mM으로 어닐링 온도를 55℃로 했다. 그 결과, 180bp에서 1.3kb까지의 타겟을 효율적으로 증폭할 수 있었습니다. 
기타 실시예
참고 문헌
1) FC Lawyer et al., J. Biol. Chem. , 264 : 6427-6437 (1989)
2) T. Nagahama et al., Stem cells , 19: 425-435(2001)
제품 내용
rTaq DNA Polymerase(5U/μL) 50μL×1개
10×Buffer[TAP-2B(Mg별첨 타입)
/TAP-2M(Mg 함유 타입)] 1mL×1개
25mM MgCl 2 (Mg별첨 타입만) [TAP-2S]
1mL×1개
2mM dNTPs[NTP-201] 1mL×1개
모양:
20mM Tris-HCl(pH8.0)
100mM KCl
0.1mM EDTA
1mM DTT
0.5% Nonidet ® P-40
0.5% Tween ® 20
50% Glycerol
10xBuffer 구성:
[Code No. TAP-2B]
100mM Tris-HCl(pH8.3)
500mM KCl
[Code No. TAP-2M]
100mM Tris-HCl(pH8.3)
500mM KCl
15mM MgCl2
활동 정의:
75℃에서 30분에 10nmol의 전체 뉴클레오티드를 산불용성 분획에 도입하는 효소량을 1U로 합니다.
기원:
E.coli 재조합체
- 주의사항
PCR에는 제품에 첨부되어 있는 dNTPs 또는 별매의 dNTPs Mixture (2mM) [NTP-201]을 사용해 주십시오. 다른 dNTPs에서는 충분한 성능을 얻지 못할 수 있습니다.
- 기본 반응 조건
멸균 증류수 XμL
10×버퍼 5μL
25mM MgCl 2 3μL (1.5mM)
각Primer 5~50pmoles each
2mM dNTPs 5μL(0.2mM)
Taq(5U/μL) 0.25~0.5μL(1.25~2.5U)
주형 1~50ng(Plasmid)
10~1000ng(Genomic DNA)
~1μL(역전사 반응액)
Total 50μL
- 원포인트 조언
● 핫 스타트 PCR
항 Taq DNA polymerase 항체 "anti-Taq high"를 혼합하여 사용하면 핫 스타트 PCR이 가능합니다.
● PCR 산물의 클로닝 본 효소에 의한 PCR 산물은 TA 클로닝법에 의해 클로닝할 수 있습니다. 고효율 TA 클로닝 키트 "TArget Clone TM "등을 사용할 수 있습니다. 본 효소는 교정 활성을 나타내지 않기 때문에 정확성은 그다지 좋지 않습니다.
● PCR 조건의 설정에 대해서 신장 반응은 타겟 1kb에 대해 1min.을 표준으로 합니다. 어닐링 온도는 Tm 값에서 5-10°C 낮게 설정합니다. 만약 밴드가 인정되지 않는 경우에는 더욱 어닐링 온도를 낮추거나 마그네슘 농도를 올려 검토합니다. 엑스트라 밴드가 발생하면 어닐링 온도를 높게 설정하거나 마그네슘 농도를 낮추는 것이 좋습니다.
※프라이머의 Tm값의 계산은 최근 접염기 대법(Nearest Neighbor method)을 이용하고 있습니다. 프라이머의 Tm값 계산표(EXCEL)는, 이쪽 으로부터 다운로드 받을 수 있습니다. 이노신을 포함하는 프라이머의 Tm 값은 이 방법으로 계산할 수 없습니다.
English Page
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활동 정의:
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- 주의사항
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