본 제품은 Barnes 등의 방법을 이용하여 개발된 고효율 PCR용 효소입니다.
강한 3'→5' Exonuclease 활성(교정 활성)을 나타내는 KOD DNA Polymerase와 유전자 조작에 의해 3'→5' Exonuclease 활성을 결실시킨 변형형 KOD DNA Polymerase를 최적의 비율로 혼합함으로써 우수 PCR 성능을 실현했습니다.
단일 효소계(KOD DNA polymerase와 Exo(-) KOD DNA polymerase)로 구성되어 있기 때문에 최적 조건, 보존 안정성, 열 안정성이 동일하며 안정된 성능을 발휘할 수 있습니다. .

●신장 시간 30sec./1kb
신장 시간을 Taq DNA polymerase의 절반 시간으로 설정할 수 있기 때문에 빠른 PCR로 향합니다.

● 뛰어난 PCR 퍼포먼스 미량의 주형으로부터도 효율적으로 PCR을 실시할 수 있기 때문에, 일반적인 PCR 외에 콜로니 다이렉트 PCR이나 바이러스/세균의 검출 등에 적합합니다.

● 우수한 내열성
Taq DNA polymerase보다 내열성이 우수하고 열변성 단계의 온도를 높게 설정할 수 있기 때문에 GC-rich인 고차 구조를 취하는 것과 같은 타겟에 유효합니다.

● TA 클로닝 대응 본 효소의 PCR 산물은 TA 클로닝 가능합니다. 정확성은 Taq DNA polymerase의 약 3배 정도입니다.

식민지 직접 PCR로 인서트 점검

당사 TA 클로닝 키트 : TArget Clone ^TM [ Code No. TAK-101 ]을 사용하여 pTA2 Vector에 4.5kb의 PCR 제품을 클로닝 한 후, 콜로니 다이렉트 PCR을 실시하고, 인서트의 유무를 확인했습니다. (숙주 대장균 : JM109)

3 식민지에 삽입물이 삽입되어 있는지 확인할 수 있습니다. 프라이머 이량체의 생성은 거의 보이지 않았다.

또한 데이터는 나타내지 않았지만 정제 후의 시퀀스 결과도 양호했습니다.

실시 예 2 : 다중 PCR에 의한 STEC의 병원성 관련 유전자의 검출

1) M. Morikawa et al., Appli. Environ. Microbiol. , 60 : 4559-4566(1994)
2) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol. , 63 : 4504-4510(1997)
3) M. Nishioka et al., J. Biotechnology , 88 : 141-149(2001)
4) WM Barnes, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91 : 2216-2220(1994)
5) H. Kanzaki, J. Bone and Mineral Res. , 17 : 210-220(2002)
6) H. Nakayashiki et al., Genetics , 153 : 693-703(1999)
7) A. Kikuchi et al., Gene , 236 : 293-301(1999)

제품 사용 문헌:
1) H. Sawai et al., Chem. Commun ., 2604-2605.(2001)
2) Y. Ogawara et al., J. Biol. Chem ., 277 (24): 21843-21850(2002)
3) T. Ohbayashi et al., Org. Biomol. Chem. , 3 : 2463-2468. (2005)