본 제품은 높은 정확성·증폭 효율을 가지는 개변형 KOD DNA polymerase(UKOD)를 이용한 PCR용 2×마스터 믹스입니다.
개량형 신장 가속기를 함유하기 때문에, 1kb까지는 1sec., 1~10kb는 5sec./kb, 10kb 이상은 10sec./kb로 PCR을 실시할 수 있습니다. 높은 성공률을 겸비하고, 미정제의 크루드 샘플로부터의 증폭이나, 이노신(dI)이나 우라실(dU)을 포함한 프라이머 템플릿을 이용한 PCR에도 이용할 수 있습니다.
또한 Polymerase 활성과 3'→5'Exonuclease 활성을 억제하는 2종류의 모노클로날 항체가 혼합되어 있어 특이성이 높은 Hot start PCR을 실시할 수 있습니다.

● 고속 PCR 가능
1kb까지는 1s.

●간편 프라이머·템플릿 이외의 성분이 미리 혼합되어 있어, 반응액 조제가 용이하고, 또 재현성이 높은 결과를 얻을 수 있습니다. 또한 KOD One ^® PCR Master Mix -Blue- [Code No. KMM-201]에는 Loading Dye(BPB)가 혼합되어 있어 반응 종료 후 그대로 겔에 어플라이 할 수 있습니다.

● 우수한 정확성
Taq DNA polymerase의 약 80배와 KOD 시리즈 최고 수준의 정확성을 유지하고 있습니다.

크루드 샘플로부터도 효율적으로 증폭 

● 이노신 (dI)과 우라실 (dU)을 포함하는 프라이머 템플릿을 이용한 PCR에 대응

1. 고속 PCR에 의한 200bp~10kb의 타겟 증폭

인간 게놈 DNA를 템플릿으로 하여 신장 시간이 짧은 고속 PCR 사이클로 증폭을 실시했습니다.
그 결과, 본 제품에서는 1 kb 이하의 타겟은 신장 시간 1 sec.로, 1~10 kb의 타겟은, 5 sec./kb로 명확한 밴드를 확인할 수 있었습니다.

2. 크루드 샘플로부터의 증폭

마우스 테일 라이세이트(알칼리 용해법), 혈액을 이용하여 마우스 Thy-1 유전자, 인간 β-globin 유전자의 증폭을 실시했습니다. 반응은 각각의 PCR 효소의 권장 조건에 따라 5초/kb의 연장 시간에서 수행하였다. 그 결과, KOD ^One® PCR Master Mix에서만 명확한 밴드를 확인할 수 있었습니다.

3.역전사 반응액의 반입 가능량의 확인

역전사 반응액(cDNA)에 포함된 RNA는 PCR에 대해 저해적으로 작용하기 때문에 대량의 cDNA의 첨가는 반응 저해로 이어집니다. 거기서, cDNA의 반입 가능량을 확인하기 위해, cDNA의 첨가량을 척하고, TFR 유전자의 검출을 실시했습니다.
그 결과, KOD ^One® PCR Master Mix 시리즈는 RNA에 의한 저해를 받기 어렵고, 종래품이나 타사품에서는 증폭 곤란한 다량의 cDNA를 첨가한 조건에서도 양호한 증폭을 실시할 수 있었습니다.