용도

●PCR

설명

KOD FLEX™ PCR Master Mix는 개량된 KOD DNA polymerase(UKOD), elongation accelerator, 독자적인 버퍼 기술이 결합된 고성능 2× PCR 마스터믹스입니다.
증폭이 어려운 타겟(high GC/AT 함량, long DNA, 비특이적 증폭 문제 등)에서도 높은 효율과 낮은 bias로 안정적인 PCR 증폭이 가능합니다.

특히, 생물학적 시료 등 정제되지 않은 시료에서도 증폭이 가능합니다.

본 제품은 Taq DNA polymerase 대비 약 **11배 높은 정확도(fidelity)**를 보이며, 생성된 PCR 산물은 클로닝 후 시퀀싱 분석에 적합합니다.

또한 염기서열 구성이나 amplicon 크기에 따른 증폭 bias가 낮아, 차세대 시퀀싱(NGS)을 위한 라이브러리 증폭에 유용합니다.

Hot Start PCR 구현을 위해 KOD DNA polymerase와 그 exonuclease 활성을 억제하는 항체 두 종류를 포함하고 있으며, proofreading 기능(3ʹ→5ʹ exonuclease)에 의해 blunt-end PCR product를 생성합니다.

특징

원리

실시예

1. 긴 타겟 증폭

• human genomic DNA에서 최대 40 kb 길이의 타겟까지 증폭에 성공

• KOD FLEX™ PCR Master Mix는 긴 증폭에도 적합한 효율성과 안정성을 보임

2. GC/AT-rich 타 증폭

• human genomic DNA를 사용하여 GC-rich(약 70%) 및 AT-rich(약 30%) 영역을 증폭

• KOD FLEX™는 GC 함량이 높거나 낮은 영역 모두에서 안정적인 증폭 성능을 보여줌

3. Crude Sample (혈액)에서의 증폭

• WT-1 (2.5 kb)의 혈액을 주형으로 사용하여 증폭

• 전체 반응 혼합물의 30%에 해당하는 혈액을 포함해도 PCR 저해 효과 없이 증폭 성공
  → 정제되지 않은 시료(crude sample)에서도 우수한 내성 입증

4. 다양한 타겟 증폭

• 타사 시약에서는 비특이적 증폭 혹은 증폭 실패가 있었던 반면,
  KOD FLEX™ 사용 시 모든 타겟에서 명확한 증폭 확인

5. 멀티플렉스 PCR

• human genomic DNA를 사용하여 점진적으로 타겟 수를 늘려가며 멀티플렉스 PCR 수행

• 타사 시약은 일부 타겟 증폭 실패 발생

• KOD FLEX™는 증폭 대상 수에 대응하는 모든 밴드를 정확하게 증폭하여 높은 반응 효율과 특이도를 보임

6. NGS 라이브러리 증폭

• E. coli (GC 약 51%), Thermus thermophilus (GC 약 70%) 게놈 기반 NGS 라이브러리를 생성

• KOD FLEX™ PCR Master Mix로 7 사이클 증폭 후, PCR-free 라이브러리와 비교

• Illumina MiSeq™ 시스템을 이용한 시퀀싱 결과,
  GC 함량에 따른 coverage 차이가 거의 없으며, bias 없이 안정적인 라이브러리 증폭 확인됨

  
  

  
  

기타 실시예