1차 항체 및 2차 항체의 반응액(희석액)으로서, Western blot이나 ELISA 등의 항원-항체 반응의 특이성을 증가시켜주는 버퍼입니다.
본 시약은 Solution1과 Solution2로 이루어져 있으며, 각각 1차 항체 및 2차 항체의 반응액으로 사용합니다. 1차 항체용과 2차 항체용으로 각각 용액 조성이 최적화되어 있기 때문에 background를 억제하며 개선된 signal을 얻을 수 있습니다.

●민감도와 특이성 개선

반응 조건의 최적화를 통해 항원-항체 반응의 특이성을 증가시키며, 기존 방법 보다 매우 높은 signal 결과를 얻을 수 있습니다. 특히 반응이 잘 되지 않는 항체에서 최적의 효과를 나타내었습니다.

● 넓은 범용성

다양한 항체에 사용이 가능합니다.

●사용하기 쉬운 Ready-to-use 타입

희석 필요 없이 바로 사용이 가능한 간편한 버퍼 입니다.

1. 소 부신 수질 크로마핀 세포의 인산화 Akt 및 ERK 검출

배양 소 부신 수질 크로마핀 세포의 배양액에 인슐린을 임의의 농도로 첨가하고, 5분간 자극을 한 세포의 추출물를 샘플로서 웨스턴 블롯법에 의해 인산화 Akt 및 ERK 단백질의 검출을 실시했습니다 . 그 결과, 기존 방법(TBS-T 사용)에 비해 Can Get Signal® ^을 이용했을 경우, 명백한 신호의 증가과, background 억제를 확인할 수 있었습니다.

*미야자키대학 의학부 약리학 강좌
야나기타 토시히코 선생님 제공

2. 인간 편평 상피 세포 (A431)의 EGFR 검출

인간 편평 상피 세포 (A431)에서 발현되는 EGFR (Epidermal Growth Factor)을 웨스턴 블롯에서 검출했습니다. A431 세포의 Lysate를 샘플로서 1차 항체 반응에는 Can Get Signal ^® Solution 1
[1차 항체:항인간 EGFR 항체(mouse IgG1)]를,
2차 항체 반응에는 Solution 2
[2차 항체:항 마우스 IgG(Fab Specific, HRP 표지)]를 각각 이용하여 검출하였다.
또, 대조로서 TBS-T(종래법)에 있어서도 같은 검토를 실시했습니다. 그 결과, 종래법에서는 비특이 밴드가 짙고, 목적 밴드가 거의 검출되지 않았지만, Can Get Signal ^{® 를} 사용하는 것으로, 현저한 비특이 밴드의 감소와, 신호의 증가가 되는 것을 확인 하였습니다.

3.His 태그 융합형 ERK2 단백질의 검출

3.His 태그 융합된 ERK2 단백질 검출"" />

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무세포 단백질 합성법을 이용하여 합성한 인간 유래 His-tag 융합형 MAP 키나아제(His-ERK2)를 샌드위치 ELISA법(고상 항체: 항ERK2 모노클로날 항체, 1차 항체: 항His 태그 폴리클로날 항체, 2 다음 항체: 항토끼 IgG-HRP 항체)에 의한 검출을 실시했습니다. 그 결과, 항체 반응을 시판의 블로킹제 중에서 행하는 종래법에서는 거의 검출할 수 없었지만, Can Get Signal ^® 을 이용한 경우에 있어서는, 저농도 영역에서도 높은 S/N비로 고감도 에서 검출이 가능했습니다.

※그 외의 실시예

실시 예 4 : HEK293T의 신규 암 유전자 산물 MM-1α의 검출 (웨스턴 블롯)
실시 예 5 : 마우스 해마에서 NR2A (NMDA receptor subunit) 발현 양의 검출 (웨스턴 블롯)
실시 예 6 : 마우스 골격근의 인산화 Smad 검출 (웨스턴 블롯)
실시 예 7 : 인간 편평 상피암 세포에서 발현되는 Cytokeratin 19 단백질의 검출 (웨스턴 블롯)
실시 예 8 : 소 초기 배아 샘플로부터의 DNMT1 검출 (웨스턴 블롯)
실시예 9: 밀리포어사 단백질 면역 검출 장치 「SNAP id」와 면역 반응 촉진 시약 「Can Get Signal」을 이용한 신속·고감도 웨스턴 블롯

1)N. Watanabe, et al., Proc Natl Acad Sci US A. , 102 (33):11663-8.(2005)
2)M. Katsuno, et al., Proc Natl Acad Sci USA ; 102 (46):16801-6.(2005)
3) K. Shimono, et al., J Biol Chem. , 280 (47):39436-47.(2005)
4) Y. Matsuzono, et al., J Biol Chem. , 281 (1):36-42.(2006)
5) T. Hanada, et al., Autophagy . 2 :110-118.(2006)
6) T.Sugano et al., J. Neurochemistry . 98 : 20 (2006)