HOMERNA-direct ® Realtime PCR Master Mix(SYBR, Probe)
RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix(SYBR, Probe) [QRT-101,QRT-201]
가격표
RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix
| Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|
| Code No.QRT-101 | 포장 500μL×5개(250회용/20μL반응) | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
| Code No.QRT-101X5 | 포장 (500μL×5개)×5(250회용/20μL 반응)×5 | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix -ROX Free-
| Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|
| Code No.QRT-101RF | 포장 1.25mL×2개(250회용/20μL반응) | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
RNA-direct ® SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix
| Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|
| Code No.QRT-201 | 포장 500μL×5개(250회용/20μL반응) | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
| Code No.QRT-201X5 | 포장 (500μL×5개)×5(250회용/20μL 반응)×5 | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
용도
● One-step Real-Time PCR kit
설명
Tth DNA polymerase는 호열 박테리아: Thermus thermophilus 에서 분리된 polI 형 DNApolymerase입니다. Mn 2+ 존재 하에서 역전사 활성을 나타내는 독특한 효소이며, 본 효소를 사용함으로써 동일한 튜브 내에서 cDNA 합성 반응과 PCR을 연속적으로 실시할 수 있습니다. 본 시약은, 그 특성을 이용한 「1 enzyme·1-step」의 qPCR 시약이며, RTase와 Taq DNA polymerase를 동일 반응계에서 사용하는 「2 enzyme・1-step」계의 시약에 비해, 단일 효소로 반응을 실시하기 때문에 최적 조건 설정이 용이하고, 고효율로 해석을 실시할 수 있습니다.
특징
● High throughput 1-step qPCR에 적합
RNA에서 고효율의 실시간 PCR을 할 수 있기 때문에, 신속성을 필요로 하는 Screening 실험에 적합합니다.
● 높은 특이성 Hotstart로 비특이 반응을 억제하였습니다.
● 다양한 용도에 응용 Probe와 SYBR™ Green I 모두 가능합니다.
● 다양한 장비에 호환 가능 다양한 실시간 PCR 장치에 호환 됩니다.
| Probe 버전 | SYBR 버전 |
| 기종별 프로토콜은 이쪽 | 기종별 프로토콜은 이쪽 |
● 보정이 필요한 측정 기기에 호환가능 [Code No. QRT-101, 201]
패시브 레퍼런스를 포함하고 있으므로 보정이 필요한 측정 기기(Applied Biosystems ® StepOnePlus™ 등)에도 호환 가능합니다.
● ROX Dye 검출에 대응 [Code No. QRT-101RF]
ROX가 포함되지 않기 때문에, ROX Probe를 이용한 검출에도 사용할 수 있어 Multiplex PCR에도 이용할 수 있습니다.
● 입체 구조를 형성하기 쉬운 RNA와 GC-rich 타겟에도 호환 가능
원리
실시예
1. TaqMan ® 프로브 분석에서 성능 비교
RNA-direct ® VS 2 효소 · 1-step (장치 : BioFlux Line Gene 사용)
mRNA를 주형으로 한, Taq+RTase 혼합형인 A사 시약(2효소 1-step계)과 비교 실험을 실시했습니다. 
인간 배양 세포 유래 mRNA (10n 배 희석 계열 (n = 2))를 주형으로하여 TaqMan ® 프로브 분석에 의한 β 액틴 mRNA의 검출을 실시했다 (100 희석 반응 액 20 μL에 5 ng의 Poly (A) + RNA 포함되도록 희석).
그 결과, RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix에 의한 반응은 A사 시약 권장 반응 조건에서도 상승 속도와 선형성에서 우수한 결과를 나타냈다.
2. SYBR™ Green 분석에서 선형성 검토
RNA-direct ® > VS 2 효소 · 1-step (장치 : ABI 사 PRISM ® 7900HT 사용) 
HeLa 세포 유래의 Total RNA(10n배 희석 계열(n=2))를 주형으로 하고, SYBR™ Green 검정에 의한 β 액틴 mRNA의 검출을 행했습니다(100 희석의 반응액 20 μL에 75 ng의 Total RNA가 포함된다) 처럼 희석).
그 결과, Taq+RTase 혼합형인 B사 키트와 비교하여 RNA-direct ® SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix에 의한 반응은 적어도 7 오더의 희석 계열에서 높은 상관성을 나타냈다. 
3. SYBR™ Green 분석에서의 성능 비교
RNA-direct ® VS 1 효소 · 1-step (장치 : Roche LightCycler TM 사용) 
인간 배양 세포 유래 Poly(A)+RNA(10n배 희석 계열(n=2))를 주형으로 하고, SYBR™ Green 검정에 의해 G3PDH mRNA의 검출을 행했습니다(100희석의 반응액 20μL에 5ng의 Poly( A) + RNA를 포함하도록 희석).
그 결과, Tth DNA Polymerase를 사용한 C사 시약과 비교하여, RNA-direct ® SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix에 의한 검출에서는, 상승의 속도, 신호의 강도 및 검출 감도에 있어서 크게 웃도는 성능을 보여주었습니다.
실시예 4: 1-step Realtime PCR에 의한 단백질 키나아제 발현 정량
실시 예 5 : TaqMan ® 프로브 분석에서 멀티 플렉스 성능 비교
기타 실시예
참고 문헌
제품 내용
【QRT-101, QRT-201】
Master Mix
50mM Mn(OAc) 2
500μL×5개
500μ L × 1개【QRT-101RF】
Master Mix
50mM Mn(OAc) 2
1.25mL×2개
500μ L×1개(50 μL 반응으로 100 회용, 20 μL 반응으로 250 회용입니다)
- 기본 반응 조건
<반응액 일례>
RNase free water
Master Mix
50mM Mn(OAc) 2
각 Primer
RNA 샘플Total Volume
(TaqMan ® probe) * 1
(50×Referense dye) *2
XμL
10 μL
1μL
10pmoles each
Total RNA<1μg
mRNA<200ng 등
(4pmoles)
(0.4/0.04μL)
20 μL*1 QRT-101, QRT-101RF의 경우
*2 QRT-101RF를 ROX에 의한 보정이 필요한 장치
에서 사용하는 경우
(QRT-201 : Applied Biosystems ® 7900HT Standard 모드의 경우)
90℃, 30sec.
61 ℃ 20 분.
↓
95 ℃ 60 초.
↓
95 ℃ 15 초.
55~65℃ 15sec. 45cycles
74 ℃ 45sec.
※어닐링 온도는, 프라이머의 Tm등을 생각해, 55~65℃의 사이에서 조정합니다.
(QRT-101RF)
90℃, 30sec.
60 ℃ 20 분.
↓
95 ℃ 5 초.
55~65℃ 15sec. 45cycles
- 원포인트 조언
●보존에 대해서 장기 보존의 경우는 -20℃(차광) 보존을 추천합니다만, 단기간에 연속 사용하는 경우, 3주간 정도이면 4℃(차광) 보존 가능합니다.
●역전사 반응시의 프라이머에 대해서
PCR용 Reverse Primer가 그대로 역전사용 프라이머가 됩니다.
별도로 첨가할 필요는 없습니다. 또한 Oligo dT 또는 Random Primer는 사용할 수 없습니다.
●샘플 첨가량에 대해서
10μL 등의 소량으로 반응시키는 경우는 샘플 첨가량을 1μL 등의 극소량으로 하지 않고 희석하여 2μl 정도 첨가함으로써 피펫 오차가 억제되어 양호한 결과를 얻을 수 있습니다.
●패시브 레퍼런스 색소에 관해서 【QRT-101, QRT-201】
미리 혼합되어 있습니다. 플레이트 타입의 PCR 기기에 그대로 사용할 수 있습니다. 수동 참조 염료를 사용하지 않는 PCR 장비에 영향을 미치지 않습니다.
【QRT-101RF】
포함되어 있지 않습니다. Applied Biosystems ® 기기나 애질런트 사제 기기 등에서 웰간의 형광 강도 및 분주 오차 보정을 위해 패시브 레퍼런스를 사용하는 경우는 별매품인 50×ROX reference dye [Code No. ROX-101] 사용하십시오.
●망간 용액에 관하여
RNA-direct ® Realtime PCR 시리즈에는 필요한 양의 망간 아세트산 용액이 별도의 튜브 (오렌지 라벨)로 첨부되어 있습니다.
관련상품
자성 비드 분리 스탠드
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 Magical Trapper | Code No.MGS-101 | 포장 1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ 실온 |
cDNA 합성용 배양 세포 용해 시약
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 SuperPrep II Cell Lysis Kit for qPCR | Code No.SCQ-501 | 포장 100회용 | 저장 온도 | 설명서 사양
|
SDS | 법규제 ※ -20℃ |
실시간 PCR용 수동 참조
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 50×ROX reference dye | Code No.ROX-101 | 포장 5mL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
제품 내용
【QRT-101, QRT-201】
Master Mix
50mM Mn(OAc) 2
500μL×5개
500μ L × 1개【QRT-101RF】
Master Mix
50mM Mn(OAc) 2
1.25mL×2개
500μ L×1개(50 μL 반응으로 100 회용, 20 μL 반응으로 250 회용입니다)
- 기본 반응 조건
<반응액 일례>
RNase free water
Master Mix
50mM Mn(OAc) 2
각 Primer
RNA 샘플Total Volume
(TaqMan ® probe) * 1
(50×Referense dye) *2
XμL
10 μL
1μL
10pmoles each
Total RNA<1μg
mRNA<200ng 등
(4pmoles)
(0.4/0.04μL)
20 μL*1 QRT-101, QRT-101RF의 경우
*2 QRT-101RF를 ROX에 의한 보정이 필요한 장치
에서 사용하는 경우
(QRT-201 : Applied Biosystems ® 7900HT Standard 모드의 경우)
90℃, 30sec.
61 ℃ 20 분.
↓
95 ℃ 60 초.
↓
95 ℃ 15 초.
55~65℃ 15sec. 45cycles
74 ℃ 45sec.
※어닐링 온도는, 프라이머의 Tm등을 생각해, 55~65℃의 사이에서 조정합니다.
(QRT-101RF)
90℃, 30sec.
60 ℃ 20 분.
↓
95 ℃ 5 초.
55~65℃ 15sec. 45cycles
- 원포인트 조언
●보존에 대해서 장기 보존의 경우는 -20℃(차광) 보존을 추천합니다만, 단기간에 연속 사용하는 경우, 3주간 정도이면 4℃(차광) 보존 가능합니다.
●역전사 반응시의 프라이머에 대해서
PCR용 Reverse Primer가 그대로 역전사용 프라이머가 됩니다.
별도로 첨가할 필요는 없습니다. 또한 Oligo dT 또는 Random Primer는 사용할 수 없습니다.
●샘플 첨가량에 대해서
10μL 등의 소량으로 반응시키는 경우는 샘플 첨가량을 1μL 등의 극소량으로 하지 않고 희석하여 2μl 정도 첨가함으로써 피펫 오차가 억제되어 양호한 결과를 얻을 수 있습니다.
●패시브 레퍼런스 색소에 관해서 【QRT-101, QRT-201】
미리 혼합되어 있습니다. 플레이트 타입의 PCR 기기에 그대로 사용할 수 있습니다. 수동 참조 염료를 사용하지 않는 PCR 장비에 영향을 미치지 않습니다.
【QRT-101RF】
포함되어 있지 않습니다. Applied Biosystems ® 기기나 애질런트 사제 기기 등에서 웰간의 형광 강도 및 분주 오차 보정을 위해 패시브 레퍼런스를 사용하는 경우는 별매품인 50×ROX reference dye [Code No. ROX-101] 사용하십시오.
●망간 용액에 관하여
RNA-direct ® Realtime PCR 시리즈에는 필요한 양의 망간 아세트산 용액이 별도의 튜브 (오렌지 라벨)로 첨부되어 있습니다.
※ 법규제에 대해서
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