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One-step Real-Time PCR kit [Probe], [High Fedility]

THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit [QRZ-101]

가격표
용도
설명
특징
원리
실시예
관련 제품

가격표

캐리오버 오염 방지 시약과의 세트품

Code No.	포장	저장 온도	설명서 사양	SDS	법규제 ※
Code No.QRZ-101	포장 250회용/20μL 반응	저장 온도 -20℃	설명서 사양	SDS	법규제 ※ 없음

SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix

품명	Code No.	포장	저장 온도	설명서 사양	SDS	법규제 ※
품명 THUNDERBIRD Probe One-step qRT-PCR/UNG Set	Code No.QRZ101/UNG101	포장 QRZ-101과 UNG-101세트	저장 온도 -20℃	설명서 사양	SDS	법규제 ※ 없음

용도
﻿﻿﻿﻿﻿● One-step Real-Time PCR kit
설명
 본 키트는 역전사효소로서 ReverTra Ace ® 와 PCR 효소로서 Tth DNA Polymerase를 이용한 1-step qPCR 키트입니다. TaqMan ® 실시간 PCR에 사용할 수 있습니다.

 역전사 반응과 PCR을 동일한 반응계에서 연속적으로 실시하기 때문에, 반응액의 분주 조작이 1회로 끝나고, High throughput screening에 적합합니다. 또한 샘플 간 carryover 오염을 최소화합니다.



 이 제품은 두 종류의 효소와 최적화된 버퍼 조성을 조합하여 미량의 RNA를 신속하게 정량할 수 있게 했습니다. 이 때문에 RNA 바이러스와 발현량이 적은 mRNA의 정량에 유리합니다. 또한 표적 서열의 영향을 받기 어렵고 다양한 RNA를 고감도로 검출할 수 있습니다.
특징
● 신속·고감도
 TaqMan ® probe를 이용한 원스텝 실시간 RT-PCR 법으로 미량의 RNA를 신속하고 고감도로 검출할 수 있습니다.

 ●서열 바이어스의 저감 타겟의 배열에 좌우되는 일 없이, 다양한 RNA 를 고감도로 검출이 가능합니다.
 다색 검출(Multiplex)에서의 각 타겟의 증폭의 편향도 최소한으로 억제합니다.

 ● 협잡물 내성의 향상 헤마틴 등의 PCR 저해 활성을 나타내는 협잡물의 영향을 회피할 수 있습니다.

 ● dUTP 사용 
 dTTP 대신 dUTP가 사용됩니다. 열에 민감한 Uracil-N-glycosylase (UNG)를 첨가하면 캐리 오버 오염으로 인한 위양성을 방지 할 수 있습니다.

 *이 키트에는 UNG가 포함되어 있지 않습니다. 별도 판매의 Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Heat-labile [ Code No. UNG-101 ]을 사용할 수 있습니다.

 ●다양한 기기에 대응 【대응 가능 기기 예】 

 기계 ROX 최종 농도
 (첨가량)
 Applied Biosystems® 7000, 7300, 7700, 7900HT, StepOne™, StepOnePlus™ 1×
 (1/50량)
 Applied Biosystems ® 7500, 7500Fast, ViiA ™ , QuantaStudio, Agilent
 Technologies Mx3000P, Mx3005P, Mx4000 0.1×
 (1/500량)
 Roche Diagnostics LightCycler® 2.0, LightCycler® Nano, Bio - Rad
 MiniOpticon™, CFX96 Touch™, BioFlux Line Gene 불필요


 기종별 프로토콜은 이쪽
원리
실시예
1. 엔테로 바이러스 RNA의 고감도 검출  엔테로 바이러스 RNA를 4 배 희석하고 TaqMan ® probe 법을 사용하여 검출 감도 및 정량성을 타사 제품과 비교했습니다.

 프라이머 TaqMan ® probe는 논문에 기재된 것을 (최적화하지 않고) 그대로 사용했습니다.
 분석에는 Applied Biosystems ® StepOnePlus ™ 를 사용했습니다.

 이 시약에서만 10 카피 이하의 RNA를 검출할 수 있어 폭넓은 다이나믹 레인지에서의 정량을 실시할 수 있었습니다. 본 키트는 RNA 바이러스나 발현량이 적은 mRNA의 검출·정량에 유효합니다.
 2. 다양한 바이러스의 검출 감도 비교 11 종류의 바이러스 RNA의 4 배 희석 계열을 제작하고 TaqMan ® probe 법을 사용하여 최고 검출 감도를 비교했습니다. 

 프라이머 TaqMan ® probe는 논문에 기재된 것을 그대로 사용했습니다.
 분석은 Applied Biosystems ®
 StepOnePlus ™ 를 사용했습니다.

 그래프는 검출된 가장 낮은 사본 수를 각 시약에 대해 플롯한 것이다.

 그 결과, 본 키트에서만, 모든 타겟을 30 카피 이하의 감도로 검출·정량이 가능하다는 것을 알았습니다.
 이 실험은이 시약이 표적 서열에 의존하지 않고 다양한 RNA를 고감도로 검출 할 수 있음을 보여주었습니다.
 3. 다색 검출(Multiplex)계에서의 발현 정량 3 종류의 형광 색소로 표지 한 TaqMan ® probe를 사용하여 단독 검출과 3 종류의 TaqMan ® probe를 한 번에 사용하는 Multiplex 검출 시스템에서 IL-β, TNF-α, GAPDH 유전자의 발현량을 해석합니다. 했다.
 실험에는 HeLa S3 RNA (1pg ~ 100ng의 10배 희석 [6단계])를 샘플로 사용하여 Roche Diagnositics사 LightCycler 96에서 해석을 실시했습니다.
 그 결과, 각 유전자를 단독(그림 1) 및 3채널을 이용한 Multiplex 검출(그림 2)에서 동등한 감도로 검출 가능하고, PCR 효율과 상관 계수에 큰 차이는 인정되지 않음 알았습니다 (표 1). 

 4. 임상 검체를 이용한 RS 바이러스 A형 및 B형의 동시 정량 20 검체의 인두 봉제액으로부터 추출한 RNA 샘플을 이용하여, RT-PCR법 및 THUNDERBIRD ® One-step qRT-PCR Kit에 의한 qRT-PCR법에 의한 RS 바이러스의 검출을 실시했습니다.
 또한, 병행하여 항체 검사를 이용하여 해석을 실시하여 비교를 실시했습니다.
 qRT-PCR은 RS 바이러스의 A형과 B형을 판별할 수 있도록 특이적인 프라이머와 각각 다른 색소로 표지된 TaqMan ® probe를 사용하여 정량을 실시했습니다.
 분석에는 Roche Diagnositics LightCycler 96을 사용했습니다. 그 결과, 항체 검사법으로 위음성으로 판정된 검체에 대해서도, PCR법과 높은 상관으로 감염의 유무를 판정 가능했습니다. 또한 유형 판별 결과도 정확히 일치했습니다. 


 
기타 실시예

제품 내용

2×Reaction Buffer
DNA Polymerase
RT Enzyme Mix
50×Rox Reference dye ^*
RNase free water

1.25mL×2개
125μL×1개
125μL×1개
100μL×1개
1.25mL×2개

(50μL 반응으로 100회용, 20μL 반응으로 250회용이 됩니다)
* ROX 용액이 별도 첨부되어 있어 대부분의 실시간 PCR 측정 기기에 대응 가능합니다.

기본 반응 조건

새로운 코로나 바이러스 (2019-nCoV) 검출
실시예를 다른 페이지에서 소개하고 있습니다.
여기 에서 진행하십시오.

RNase free water XμL
2×Reaction Buffer 25μL
DNA Polymerase 1.25 μL
RT Enzyme Mix 1.25 μL
Forward Primer 25pmol
Reverse Primer 25pmol
^TaqMan® 프로브 10pmol
50×ROX Reference dye ^*1 1/0.1μL
(Uracil-N-Glycosylase 1unit ^*2 )
RNA 용액 YμL
Total Volume 50μL

*1 50×ROX reference dye는 Applied Biosystems ^® 기기와 같은 웰간의 형광 강도 및 분주 오차 보정을 위해 패시브 레퍼런스를 이용한 기기에서의 반응 시에 첨가해 주십시오. 또, 보정을 실시하지 않는 기기에서는 첨가할 필요는 없습니다. → 각 기종의 ROX 첨가량을 참조하십시오.

*2 UNG 처리를 실시하는 경우는 당사의 Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Heat-labile [UNG-101]과 같은 열감수성(heat-labile) UNG를 사용해 주십시오.

사이클
(20~25℃, 10min. ^*3 )
↓
50℃, 10min.
↓
95℃, 1min.
↓
95 ℃, 15 초.
60℃, 45sec. 40~45 cycles

*3 UNG 처리를 실시하는 경우는 역전사 반응 전에 UNG 반응의 스텝을 설정해 주십시오. 상기는 일반적인 온도 조건과 반응 시간을 나타내었지만 각 회사의 권장 조건에 따라 조정하십시오.

비고: 본 제품은 Chakrabarti Advanced Technology NewCo LLC.에서 US7772383의 라이센스를 받고 판매하고 있습니다.

원포인트 조언: ※ 프라이머의 Tm값의 계산은 최근 접염기 대법(Nearest Neighbor method)을 이용하고 있습니다. 프라이머의 Tm값 계산표(EXCEL)는, 이쪽 으로부터 다운로드 받을 수 있습니다. 이노신을 포함하는 프라이머의 Tm 값은 이 방법으로 계산할 수 없습니다.

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제품 내용

2×Reaction Buffer
DNA Polymerase
RT Enzyme Mix
50×Rox Reference dye ^*
RNase free water

1.25mL×2개
125μL×1개
125μL×1개
100μL×1개
1.25mL×2개

(50μL 반응으로 100회용, 20μL 반응으로 250회용이 됩니다)
* ROX 용액이 별도 첨부되어 있어 대부분의 실시간 PCR 측정 기기에 대응 가능합니다.

기본 반응 조건

새로운 코로나 바이러스 (2019-nCoV) 검출
실시예를 다른 페이지에서 소개하고 있습니다.
여기 에서 진행하십시오.

비고: 본 제품은 Chakrabarti Advanced Technology NewCo LLC.에서 US7772383의 라이센스를 받고 판매하고 있습니다.

원포인트 조언: ※ 프라이머의 Tm값의 계산은 최근 접염기 대법(Nearest Neighbor method)을 이용하고 있습니다. 프라이머의 Tm값 계산표(EXCEL)는, 이쪽 으로부터 다운로드 받을 수 있습니다. 이노신을 포함하는 프라이머의 Tm 값은 이 방법으로 계산할 수 없습니다.

※ 법규제에 대해서

독독물 및 극물 단속법 [의약용 외독물]

극독물 및 극물 단속법 [의약용 외극물]

위험소방법[위험물]

신구입시에 신청서의 제출이 필요한 제품

없음상기 법령이나 신청서의 제출에 해당하지 않는 제품

국가국민보호법[독소]

세트카르타헤나 법 (유전자 재조합 생물 등의 사용 등의 규제에 의한
생물의 다양성 확보에 관한 법률)

PPRTR법(화학물질 배출 파악 관리 촉진법) [신고 의무 물질]

노동노동안전보건법[통지 또는 표시의무물질]

기계	ROX 최종 농도 (첨가량)
Applied ^Biosystems® 7000, 7300, 7700, 7900HT, StepOne™, StepOnePlus™	1× (1/50량)
Applied Biosystems ^® 7500, 7500Fast, ViiA ™ , QuantaStudio, Agilent Technologies Mx3000P, Mx3005P, Mx4000	0.1× (1/500량)
Roche Diagnostics ^{LightCycler®} 2.0, LightCycler® Nano, Bio ^- Rad MiniOpticon™, CFX96 Touch™, BioFlux Line Gene	불필요