TTx DNA Polymerase는 Mn ²⁺ 존재 하에서 역전사 활성을 일으키는 독특한 PCR 효소입니다. 탁월한 증폭 활성과 5'→3' Exonuclease 활성을 가지므로 TaqMan ^® 분석 등 프로브를 이용한 실시간 PCR, RT-PCR에 사용할 수 있습니다. 또한 TTx DNA Polymerase는 범용 효소인 Taq DNA Polymerase와 높은 증폭 효율을 가지며, 빠른 사이클에서의 반응과 PCR 억제제를 포함한 클루드 샘플에서도 증폭이 가능합니다.

효소 반응용 buffer 정보
Code No. QRZ-1B1 : dNTPs(A, C, G, U), Mg를 포함합니다.
Code No. QRT-1B1, QRT-2BS, QRT-3BS : dNTP나 금속 이온은 포함되어 있지 않습니다.

효소 단품, 버퍼·시약과의 조합, 포장 사이즈 등 커스터마이즈 대응이 가능합니다. 자세한 내용은 문의하십시오.

● Mg ²⁺ 사용으로 고효율 DNA 증폭 가능
TTx DNA Polymerase는 범용 효소인 Taq DNA Polymerase나 Tth DNA Polymerase에 비해 신장성이 높고 효율적인 증폭이 가능합니다.

● Mn ²⁺ 사용으로 고효율 1 효소계 · 1-step RT-PCR 가능
TTx DNA Polymerase는 높은 역전사 활성을 가지며, 미량의 주형에서도 효율적으로 RT-PCR을 실시할 수 있습니다.
DNA·RNA 어느 쪽에서도 높은 증폭 효율로 증폭이 가능합니다. 60°C에서 역전사가 가능하기 때문에 GC가 풍부한 서열과 고차 구조를 취하기 쉬운 RNA의 증폭에 적합합니다.

● 고속 사이클로 검출 가능
TTx DNA Polymerase는 증폭 효율이 높기 때문에 단시간의 반응 사이클에서도 효율적인 증폭이 가능합니다.

● 크루드 샘플에 강함
PCR 저해 물질을 포함한 순수한 샘플(생체 시료, 토양, 식품 등)으로부터의 증폭이 뛰어납니다. 핵산 정제 없이 증폭이 가능합니다.

● 고속 핫 스타트 [Code No. HSTTX-129, HSTTX-219]
항 DNA 폴리메라아제 항체를 이용한 핫 스타트 시스템을 채용하고 있습니다. 항체를 이용한 핫 스타트는 비특이 반응의 억제에 강력한 효과를 나타내며, 또한 가열에 의해 신속하게 항체가 실활되기 때문에, 효소의 재활성화도 빠르고, 효소에의 고온에 의한 데미지를 최소로 제한할 수 있습니다.

● 동결 건조 시약의 조제 가능 [Code No. HSTTX-219, QRT-2BS, QRT-3BS]
동결건조를 방해하는 Glycerol을 포함하지 않으므로 동결 건조용 시약의 원료로 이용할 수 있습니다.

1. 조제한 시약의 동결건조에 의한 영향

Hot Start TTx DNA Polymerase[HSTTX-219] 및 10×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA) [QRT-2BS], 2.5×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA) < Glycerol Free> Stabilizer plus [QRT-3BS]를 사용하여 qPCR Mix를 제조하고 동결 건조 전후의 시약을 사용하여 6250, 1563, 391, 98, 24 복사본
SARS-CoV-2 RNA의 검출을 실시했습니다.

그 결과, 아래의 그림과 같이 모두 양호한 증폭이 얻어져 동결건조에 의한 영향이 없는 것을 알 수 있었습니다.

2. 혈장을 포함한 샘플로부터의 증폭

(1) 혈장을 포함한 샘플을 이용한 PCR에 의한 검출

Hot Start TTx DNA Polymerase[HSTTX-219], 2.5×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA)Stabilizer plus[QRT-3BS] 및 Taq DNA Polymerase를 기반으로 한 실시간 PCR 시약을 사용하여, TaqMan ^® 프로브에 의한 아프리카 돼지 콜레라 바이러스(ASFV)의 DNA(10 ⁶ , 10 ⁵ , 10 ⁴ , 10 ³ , 10 ² , 10 ¹ 카피)검출을 각각 추천한 반응 사이클에서 실시했습니다.

각 20 μL의 반응액에 2.5 μL의 혈장을 첨가하여 반응을 비교한 결과, Taq DNA Polymerase를 베이스로 한 실시간 PCR 시약에서는 혈장의 저해를 받아 증폭이 확인되지 않는 바, 본 시약에서는 혈장의 저해를 받지 않고 증폭이 가능하였습니다.



(2) 혈장 함유 시료를 이용한 RT-PCR에 의한 검출

Hot Start TTx DNA Polymerase[HSTTX-219], 2.5×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA)Stabilizer plus[QRT-3BS], RNase Inhibitor[SIN-201]를 사용, TaqMan ^® 프로브에 의한 SARS-CoV-2의 RNA(6250, 1563, 391, 98, 24 카피)검출을 고속 사이클에서 실시했습니다.

각 20 μL의 반응액에 대해 1.5 μL의 혈장 첨가 있어/없음으로 반응을 비교한 결과, 본 시약에서는 고속 사이클을 사용해도 효율적인 증폭이 가능하고, 혈장의 영향을 받지 않는 것이 좋은 점 입니다.

90 ℃	30 초.
65 ℃	5min.
95℃	1min.
↓
95 ℃	3 초.	×45
65℃	10 초.
※ 적자 부분은 통상보다 고속으로 실시하고 있습니다.