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Hot Start TTx (RNA) Kit [HSTTX-111]
가격표
Hot Start TTx (RNA) Kit
| Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|
| Code No.HSTTX-111 | 포장 250회용/20μL 반응 | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
용도
● One-step Real-Time PCR kit
설명
본 시약은 당사의 독자적인 효소인 TTx DNA Polymerase를 사용한 1-step Real-Time PCR kit입니다.
TTx DNA Polymerase는 역전사 활성을 가지며, 그 활성은 Mn 2+ 존재하에 강하게 촉진됩니다. 이 성능을 이용하여 역전사 반응과 PCR을 동일한 효소로 수행할 수 있습니다.
TTx DNA Polymerase는 역전사 활성을 가지므로 DNA·RNA 모두에서 높은 증폭 효율로 증폭이 가능합니다. 또한 TTx DNA Polymerase는 5'→3'Exonuclease 활성을 가지므로 TaqMan ® 어세이와 같은 프로브 어세이를 이용한 실시간 PCR에도 이용할 수 있습니다. 이 시약에는 중화 항체가 혼합되어 있어 특이성이 높은 Hot start PCR을 실시할 수 있습니다.
특징
● 고효율 1 효소계 · One-step RT-PCR 가능
TTx DNA Polymerase는 높은 역전사 활성을 가지며 미량의 샘플에서도 효율적으로 RT-PCR을 수행할 수 있습니다. 본 시약은 DNA의 검출에도 이용할 수 있습니다.
● 높은 온도에서 역전사 반응이 가능
60℃에서 역전사 반응이 가능하기 때문에, GC 리치한 타겟이나 고차 구조를 취하기 쉬운 타겟의 증폭에도 적합합니다.
● Fast Cycling mode 가능
TTx DNA Polymerase는 고효율로 짧은 시간안에 효율적인 증폭이 가능합니다.
원리
실시예
1. 인플루엔자 바이러스 RNA의 검출
Hot Start TTx (RNA) Kit 및 Tth DNA Polymerase를 기반으로 한 실시간 PCR 시약에서 TaqMan ® Probe를 사용하여 인플루엔자 바이러스 RNA를 검출했습니다. 20 μL의 반응액에 1 μL의 희석 정제 RNA를 첨가하여 반응을 실시한 결과, 본 시약에서는 Tth DNA Polymerase 기반 시약보다 높은 감도를 얻을 수 있었다. 
| 사이클 조건 | ||
| 90 ℃ 30 초. | ||
| 60 ℃ 5min. | ||
| 95 ℃ 1min. | ||
| 95 ℃ 15 초. | 50 cycles | |
| 60 ℃ 30 초. | ||
2. 고속 사이클에 의한 1-step qRT-PCR
Hot Start TTx (RNA) Kit 및 1 효소 계 · 1-step qRT-PCR 시약에서 TaqMan ® Probe를 사용하여 인플루엔자 바이러스 RNA의 검출을 고속 사이클에서 실시했습니다.
그 결과, Hot Start TTx(RNA) Kit만 효율적인 증폭이 가능했습니다.
 |
| ||||||||||||||||
| 장비 | |||||||||||||||||
| Bio-Rad CFX96 Touch Deep Well | |||||||||||||||||
기타 실시예
제품 내용
5×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA) 1mL×1개 2mM dNTPs
(dATP, dGTP, dCTP, dTTP)1mL×1개 50mM Mn(OAc) 2 250μL×1개 Hot Start TTx DNA Polymerase (4U/ μL) 62.5μL×1개 활동 정의:
75℃ 활성 측정 조건에서 30분간에 10nmol의 전체 뉴클레오티드를 산 불용성 분획에 도입하는 효소량을 1U로 한다.
- 기본 반응 조건
(μL) 멸균 증류수 X 5×Buffer for rTth/TTx(DNA/RNA) 4 2mM dNTPs 4 50mM Mn(OAc) 2 1 10μM Primer F 0.6 10μM Primer R 0.6 TaqMan ® Probe 0.4 Hot Start TTx DNA Polymerase 0.25 샘플 Y Total Volume 20 Applied Biosystems ® 기기나 애질런트 사제 기기 등에서 웰 간의 형광 강도 및 분주 오차 보정을 위해 패시브 레퍼런스를 사용하는 경우는 별매품인 50×ROX reference dye [Code No. ROX-101] 사용하십시오. → 각 기종의 ROX 첨가량을 참조하십시오.
90 ℃ 30 초. 60 ℃ 5min. 95 ℃ 1min. 95 ℃ 15 초. 40~50 cycles 60 ℃ 30 초.
- 비고
TaqMan® 은 Roche Diagnostics KK의 등록 상표입니다.
- 원포인트 조언
프라이머의 첨가량은 각각 최종 농도 0.2-0.6μM, TaqMan ® Probe의 첨가량은 최종 농도 0.05-0.3μM를 기준으로 검토해 주십시오. 증폭 효율이 좋지 않은 경우, 첨가량을 늘리는 것으로 퍼포먼스가 향상되는 경우가 있습니다만, 반대로 너무 넣으면 비특이 반응의 원인이 되어 검출 감도가 저하되는 경우가 있습니다.
Mn(OAc) 2 첨가량은 최종 농도 2.5 mM을 기본으로 하고 있습니다만, RNA 샘플의 농도나 증폭 타겟의 서열에 따라서는 Mn(OAc) 2 농도를 증감시킴으로써, 보다 양호한 결과를 얻을 수 있다 가능한 경우가 있습니다.
고속 사이클이나 크루드 샘플로부터의 검출에 있어서, 증폭 효율이 좋지 않은 경우, 효소량을 늘림(최대 2배량)에 의해 개선하는 경우가 있습니다.
Annealing/Extension의 온도는 55~65℃의 범위에서 검토하면 검출 감도 등이 개선되는 경우가 있습니다.
실시간 PCR 장치에 따라 고속 사이클에서 증폭이 가능합니다. Denature 시간을 최단 1초, Annealing/Extension 시간을 최단 1초로 검출할 수 있는 경우도 있으므로, Denature 및 Annealing/Extension 시간을 검토해 주십시오.
관련상품
실시간 PCR용 수동 참조
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 50×ROX reference dye | Code No.ROX-101 | 포장 5mL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
제품 내용
5×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA) 1mL×1개 2mM dNTPs
(dATP, dGTP, dCTP, dTTP)1mL×1개 50mM Mn(OAc) 2 250μL×1개 Hot Start TTx DNA Polymerase (4U/ μL) 62.5μL×1개 활동 정의:
75℃ 활성 측정 조건에서 30분간에 10nmol의 전체 뉴클레오티드를 산 불용성 분획에 도입하는 효소량을 1U로 한다.
- 기본 반응 조건
(μL) 멸균 증류수 X 5×Buffer for rTth/TTx(DNA/RNA) 4 2mM dNTPs 4 50mM Mn(OAc) 2 1 10μM Primer F 0.6 10μM Primer R 0.6 TaqMan ® Probe 0.4 Hot Start TTx DNA Polymerase 0.25 샘플 Y Total Volume 20 Applied Biosystems ® 기기나 애질런트 사제 기기 등에서 웰 간의 형광 강도 및 분주 오차 보정을 위해 패시브 레퍼런스를 사용하는 경우는 별매품인 50×ROX reference dye [Code No. ROX-101] 사용하십시오. → 각 기종의 ROX 첨가량을 참조하십시오.
90 ℃ 30 초. 60 ℃ 5min. 95 ℃ 1min. 95 ℃ 15 초. 40~50 cycles 60 ℃ 30 초.
- 비고
TaqMan® 은 Roche Diagnostics KK의 등록 상표입니다.
- 원포인트 조언
프라이머의 첨가량은 각각 최종 농도 0.2-0.6μM, TaqMan ® Probe의 첨가량은 최종 농도 0.05-0.3μM를 기준으로 검토해 주십시오. 증폭 효율이 좋지 않은 경우, 첨가량을 늘리는 것으로 퍼포먼스가 향상되는 경우가 있습니다만, 반대로 너무 넣으면 비특이 반응의 원인이 되어 검출 감도가 저하되는 경우가 있습니다.
Mn(OAc) 2 첨가량은 최종 농도 2.5 mM을 기본으로 하고 있습니다만, RNA 샘플의 농도나 증폭 타겟의 서열에 따라서는 Mn(OAc) 2 농도를 증감시킴으로써, 보다 양호한 결과를 얻을 수 있다 가능한 경우가 있습니다.
고속 사이클이나 크루드 샘플로부터의 검출에 있어서, 증폭 효율이 좋지 않은 경우, 효소량을 늘림(최대 2배량)에 의해 개선하는 경우가 있습니다.
Annealing/Extension의 온도는 55~65℃의 범위에서 검토하면 검출 감도 등이 개선되는 경우가 있습니다.
실시간 PCR 장치에 따라 고속 사이클에서 증폭이 가능합니다. Denature 시간을 최단 1초, Annealing/Extension 시간을 최단 1초로 검출할 수 있는 경우도 있으므로, Denature 및 Annealing/Extension 시간을 검토해 주십시오.
※ 법규제에 대해서
독독물 및 극물 단속법 [의약용 외독물]
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국가국민보호법[독소]
세트카르타헤나 법 (유전자 재조합 생물 등의 사용 등의 규제에 의한
생물의 다양성 확보에 관한 법률)
PPRTR법(화학물질 배출 파악 관리 촉진법) [신고 의무 물질]
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