Real-Time PCR kit [Probe / SYBR], [Universal]
Realtime PCR Master Mix [QPK-101, QPK-201]
가격표
실시간 PCR 마스터 믹스
SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix
용도
● Real-Time PCR kit
설명
Taq DNA polymerase를 기반으로 개발된 범용으로 사용되는 qPCR용 2× 마스터 믹스로 좋은 재현성의 결과를 얻을 수 있습니다.
또한 보정 dye가 필요한 장비와 glass fiber을 사용하는 장비 등 다양한 qPCR 장비에 호환됩니다.
각 시약은 다음과 같이 대응합니다.
* 역전사 효소 "ReverTra Ace ® "[Code No. TRT-101]와 RNase inhibitor [Code No. SIN-201]의 조합에 의해 1 단계 PCR을 할 수 있습니다.
**TaqMan ® probe 분석 및 Hybridization probe 분석 등에 사용할 수 있습니다.
특징
● 높은 특이성 Hotstart로 비특이 반응을 억제합니다.
● 다양한 용도에 응용 가능한 Probe/ SYBR™ Green I 에 사용 가능합니다.
● 다양한 장비에 호환 가능 보정 dye가 포함되어있어 보정이 필요한 측정 기기(Applied Biosystems ® StepOnePlus TM Roche Diagnostics사의 LightCycler ® 등)에도 호환 가능합니다.
●릴라이어빌리티 업 [ SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix -Plus-(QPK-212)]
버퍼 조성을 최적화함으로써 SYBR™ Green 분석 시 문제가 되는 Primer 다이머 발생을 억제하여 특이성과 재현성을 향상시키고 있습니다.
● 고순도 Taq DNA polymerase 사용
PCR의 기본 성능 개선을 도모하고 있습니다.
원리
실시예
1. SYBR™ Green 분석계에서 타사품과의 반응성 비교 [QPK-201]
SYBR™ Green 분석계의 타사 시약과 반응성의 비교를 실시했습니다. 인간 게놈 DNA를 10배씩 단계 희석(30ng에서 3pg까지의 5 수준)한 것을 샘플로서 β-actin 유전자 서열을 타겟으로 하는 PCR을 실시했습니다. 그 결과, 본 제품을 이용한 경우 증폭 효율·상승의 점에서 뛰어난 것을 알았습니다. 또한, 프라이머 이량체의 생성도 현저하지 않았다.
2. 인터컬레이터 분석의 검토 [QPK-201]
역전사 키트 ReverTra Ace -α- ® [ Code No. FSK-101 ]를 사용하여, HeLa 세포 유래 Total RNA(100ng)를 주형으로 하여 랜덤 primer에서 1st strand cDNA 합성을 실시한 후, 10배 희석을 스타트 으로 5 배씩 단계 희석하고 β-actin 유전자의 검출했다. 그 결과, 어느 농도에서도 양호한 증폭 곡선을 얻을 수 있었습니다.
증폭하지 않은 곡선 D는 블랭크(증류수)입니다.
3. 타사품과의 성능 비교 [QPK-212]
설치류 유래 게놈 DNA(10n배 희석 계열, 10ng, 1ng, 0.1ng, 0.01ng(n=2))를 주형으로 하고, 인터컬레이터 검정에 의한 타겟 유전자(약 80bp)의 검출을 실시했습니다. 그 결과 A사 시약에서는 비특이적 증폭 및 프라이머 이량체의 생성이 인정되었지만 SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix -Plus-에서는 양호한 증폭을 확인할 수 있었습니다. 또, Ct값의 간격도, 등간격이며, 다이나믹 레인지(측정 가능 범위)도 넓은 경향이 인정되었습니다.
4. TaqMan ® 분석 검토 [QPK-101]
당사 역전사 키트 ReverTra Ace -α- ® [ Code No. FSK-101 ]를 사용하여, HeLa 세포 유래 Total RNA(100ng)를 주형으로 하여 random primer에서 1st strand cDNA 합성을 실시한 후, 10배 희석을 스타트로서 5배씩 단계 희석하고, 어플라이드 바이오시스템즈사 Pre-Developed TaqMan ® Assay Reagents β-actin을 사용하여 TaqMan ® 검정을 실시하였다. 그 결과, 어느 농도에서도 양호한 증폭 곡선을 얻을 수 있었습니다. 증폭되지 않은 곡선은 공백(증류수)입니다.
기타 실시예
제품 내용
【QPK-101,QPK-201】
Master Mix 1mL×5개
(50μL 반응으로 200회용, 20μL 반응으로 500회용이 됩니다)【QPK-212】
Master Mix 1mL×5개
Plus solution 1mL×1개
(50μL 반응으로 200회용, 20μL 반응으로 500회용이 됩니다)
- 기본 반응 조건
<프로브 분석>
멸균수 14μL
Master Mix 25μL
각 Primer (10μM) 각 2μL
TaqMan 프로브 (5μM) 2μL
DNA 샘플 5μL
Total Volume 50μL
멸균수 XμL
Master Mix 25μL
(Plus solution 5μL)
각 Primer 10pmoles each~
DNA 샘플 YμL
Total Volume 50μL사이클
95 ℃, 60 초.
↓
95 ℃, 15 초.
55~65℃, 15sec. 40cycles
72℃, 45sec.※어닐링 온도는, 프라이머의 Tm등을 생각해, 55~65℃의 사이에서 조정합니다.
※신장 반응은 증폭 사이즈가 200bp 전후까지이면, 45sec.로 문제 없습니다.
관련상품
실시간 PCR용 cDNA 합성 키트
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix
제품 내용
【QPK-101,QPK-201】
Master Mix 1mL×5개
(50μL 반응으로 200회용, 20μL 반응으로 500회용이 됩니다)【QPK-212】
Master Mix 1mL×5개
Plus solution 1mL×1개
(50μL 반응으로 200회용, 20μL 반응으로 500회용이 됩니다)
- 기본 반응 조건
<프로브 분석>
멸균수 14μL
Master Mix 25μL
각 Primer (10μM) 각 2μL
TaqMan 프로브 (5μM) 2μL
DNA 샘플 5μL
Total Volume 50μL
멸균수 XμL
Master Mix 25μL
(Plus solution 5μL)
각 Primer 10pmoles each~
DNA 샘플 YμL
Total Volume 50μL사이클
95 ℃, 60 초.
↓
95 ℃, 15 초.
55~65℃, 15sec. 40cycles
72℃, 45sec.※어닐링 온도는, 프라이머의 Tm등을 생각해, 55~65℃의 사이에서 조정합니다.
※신장 반응은 증폭 사이즈가 200bp 전후까지이면, 45sec.로 문제 없습니다.
※ 법규제에 대해서
독독물 및 극물 단속법 [의약용 외독물]
극독물 및 극물 단속법 [의약용 외극물]
위험소방법[위험물]
신구입시에 신청서의 제출이 필요한 제품
없음상기 법령이나 신청서의 제출에 해당하지 않는 제품
국가국민보호법[독소]
세트카르타헤나 법 (유전자 재조합 생물 등의 사용 등의 규제에 의한
생물의 다양성 확보에 관한 법률)
PPRTR법(화학물질 배출 파악 관리 촉진법) [신고 의무 물질]
노동노동안전보건법[통지 또는 표시의무물질]