THUNDERBIRD ^® qPCR Mix는 Taq DNA polymerase를 기반으로 개발된 고효율 실시간 PCR용 마스터 믹스(2×농도)로 Realtime PCR Master Mix 시리즈의 개량품입니다.
cDNA나 바이러스 DNA를 샘플로 한 qPCR 에 적합합니다. TaqMan ^® 분석과 같은 프로브 분석과 SYBR ™ Green I 분석에 해당하는 두 가지 키트 중에서 선택할 수 있습니다.
본 제품은 새로운 인핸서 첨가 등 새로운 조성의 Mastermix로 반응의 특이성과 PCR 효율을 극대화 하였습니다. 또한 폭넓은 정량 가능 영역(다이나믹 레인지)을 실현하는 것과 동시에, 다양한 기기에 호환 가능합니다.

● 다양한 타겟을 균일하게 검출

타겟당 PCR 효율의 편차를 최소화하는 효과가 있는 신규 인핸서를 채용했습니다.

● 넓은 범위에서 검출 가능

특이적이고 고효율의 증폭은 넓은 측정 범위에서 분석이 가능해졌습니다.

● 높은 특이성 (프라이머 다이머 감소)

조성 최적화는 PCR의 특이성을 향상시켰다. 비특이적 반응의 감소 ^는 SYBR™ Green I 및 TaqMan® 분석에서 낮은 카피 수의 타겟의 검출 감도를 향상시켰다. 

● 고순도 Taq DNA polymerase 사용

PCR의 기본 성능 개선을 도모하고 있습니다.

● 다양한 기기에 대응

일반적인 블록 타입의 기기(Fast Mode에도 대응) 외에 유리 모세관을 이용한 고속 사이클러에도 대응하고 있습니다.
또, 50X ROX reference dye가 별도 첨부되어 있기 때문에, 패시브 레퍼런스를 사용하는 기기(Applied Biosystems ^® 기기, 애질런트사제 기기 등)에 있어서도, 각 기종의 특성에 따른 최적의 ROX 농도로 사용에 될 수 있습니다.

【대응 가능 기기 예】

● 고속 핫 스타트

항 Taq 폴리머 라제 항체를 이용한 핫 스타트 시스템을 채용하고 있습니다. 항체는 가열에 의해 신속하게 실활하기 때문에, 최초의 변성 시간을 단시간에 설정할 수 있습니다.

● 높은 비용 성능

실험 실행 비용을 크게 줄일 수 있습니다.

^1. SYBR® Green I 검출 시스템에 의한 반응 특이성 비교

프라이머 이량체가 발생하기 쉬운 프라이머 세트를 이용하여 각 실시간 PCR 시약에 의한 반응 특이성의 비교를 실시하였다.
프라이머 세트는 인간 β-Actin cDNA에 대한 것, 주형에는 당사의 고성능 역전사 반응용 시약 「ReverTra Ace ^® qPCR RT Kit [Code No. FSQ-101]」에 의해 합성한 HeLa 세포 Total RNA 유래 cDNA를 사용하여 cDNA의 10배 단계 희석액(4단계)과 no-template control(NTC)에 대해 각각 duplicate에서 반응을 실시했습니다. (Roche Diagnostics LightCycler ^® 1.1 사용)
이 결과, THUNDERBIRD에서는 프라이머 다이머의 출현은 인정되지 않았습니다.

2.SYBR™ Green I에 의한 cDNA 2 ^0.5 배 희석 계열의 검출

HeLa 세포의 total RNA 유래 cDNA의 2 ^0.5 배 희석 계열을 이용하여 인간 GAPDH를 검출한 결과 정확하게 검출할 수 있었다. (Applied Biosystems ^® 7900HT 사용)

실시예 3: ^SuperPrep® 으로 제조된 cDNA를 이용한 분석
실시 예 4 : 요세관 세포의 상피 간엽 전환의 분자 메카니즘 분석

1) RM de Breuil et al., PCR Methods Appl. , 3 : 57-59 (1993)
2) PM Holland et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 : 7276-7280 (1991)