^{THUNDERBIRD®} Next Probe qPCR Mix는 ^TaqMan® probe와 같은 서열 특이적 형광 표지 프로브 및 형광 표지 프라이머와 같은 다양한 검출 시스템을 통한 실시간 PCR을 위한 2x 농도의 프리믹스 시약입니다. ROX(별첨), 프로브, 프라이머 이외의 성분이 미리 혼합되어 있기 때문에, 반응액 조제를 간편화할 수 있음과 동시에, 샘플간의 형광 강도의 편차가 최소한으로 억제되어, 재현성이 높은 결과를 얻는다 수 있습니다.

본 제품은 기존 제품인 THUNDERBIRD ^® Probe qPCR Mix [Code No. QPS-101]의 조성을 더욱 개량하여 멀티플렉스 검출이나 Crude 샘플로부터의 검출에 최적화하였습니다. 또한 Fast Cycling mode 으로 실험시간이 대폭 단축 가능합니다.

● 폭넓은 다이나믹 레인지 고효율이고 특이적인 증폭이 가능하고, 넓은 측정 레인지에서의 해석이 가능합니다.

● 10초의 짧은 Extension 시간 실험 시간 단축이 가능합니다. 

● Mixture의 안정성 향상 독자적인 Buffer 조성을 채용해, 프라이머·템플릿을 혼합한 상태에서의 안정성이 향상하고 있습니다.

● PCR 저해 물질 존재하에서의 정량성・멀티플렉스 성능 향상 높은 증폭 효율・특이성을 겸비하기 때문에, PCR 저해 물질 존재하나 멀티플렉스의 검출계에서도 효율적인 증폭을 실시할 수 있습니다.

● Carry-over 오염에 의한 위양성 방지 본제품에는 dUTP가 포함되어 있기 때문에, 별매의 Uracil-DNA Glycosylase(UNG)를 사용하는 것으로, 위양성을 방지할 수 있습니다.

● 다양한 기종, 시약에 적합 일반 실시간 PCR 기기에서 사용하실 수 있습니다. 또한 역전사(RT) 시약에 관해서도 다양한 시약과 조합하여 사용할 수 있습니다. 당사 RT 시약(ReverTra Ace ^® 시리즈와 SuperPrep ^® 시리즈)을 조합하여 사용하면 보다 고정밀도·고감도의 발현 해석이 가능함을 확인하고 있습니다.

1. GAPDH cDNA의 정량

형광 염료 (FAM)로 표지 된 TaqMan ^® probe를 사용하여 GAPDH를 검출했습니다.
실험에는 HeLa 세포 total RNA 유래 cDNA (total RNA 0.2 pg ~ 20 ng 상당)를 사용했습니다.
그 결과, 0.2 pg~20 ng의 광범위하고 높은 정량성을 확인할 수 있었습니다.

2. 멀티플렉스 검출 시스템에서 정상/고속 사이클 비교

4종류의 형광 색소로 표지한 TaqMan ^® probe를 이용한 멀티플렉스 검출계에서, β-actin, GAPDH, PLA, TUB 유전자의 검출을 「신장 시간 30초의 통상 사이클」 및 「신장 시간 10초의 고속 사이클」에서 실시했습니다.

실험에는 HeLa 세포 total RNA 유래의 cDNA를 4배 희석 [5단계]를 샘플로 사용하고 Bio-Rad사 CFX96에서 해석을 실시했습니다.

그 결과 증폭이 어려운 멀티플렉스 검출계에서도 고속 사이클에서 높은 PCR 효율을 나타냈다.

실시예 3: 제조 후 반응액의 안정성
실시예 4 : 억제제 존재 하에서의 멀티플렉스 PCR①
실시예 5: 억제제 존재 하에서의 멀티플렉스 PCR②
실시예 6: UNG 첨가에 의한 캐리오버 오염 방지 효과

실시간 PCR 시약 선택 가이드