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Hot Start TTx (DNA) Kit [HSTTX-101]
가격표
실시간 PCR 키트
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
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| 품명 Hot Start TTx (DNA) 키트 | Code No.HSTTX-101 | 포장 250회용/20μL 반응 | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
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SDS
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법규제 ※ 없음 |
용도
● Real time PCR
설명
본 시약은 당사의 독자적인 효소인 TTx DNA Polymerase를 사용한 실시간 PCR 시약입니다.
TTx DNA Polymerase는 범용 효소인 Taq DNA Polymerase와 비교하여 증폭 효율이 높고, PCR inhibitor를 가지고 있는 Crude 샘플에서 direct PCR이 가능합니다.
TTx DNA Polymerase는 5'→3'Exonuclease 활성을 가지므로 TaqMan ® Probe 실시간 PCR에 사용할 수 있습니다. 이 시약에는 Antiboty가 혼합되어 있어 특이성이 높은 Hot start PCR을 실시할 수 있습니다.
특징
● 뛰어난 DNA 증폭 효율
당사의 독자적인 효소인 TTx DNA Polymerase로 최적화된 시약입니다. TTx DNA Polymerase는 범용 효소인 Taq DNA Polymerase나 Tth DNA Polymerase에 비해 신장성이 높고 효율적인 증폭이 가능합니다.
● Fast qPCR 가능
Fast cycling mode로 짧은 시간에 효과적으로 증폭이 가능합니다.
● Crude 샘플에 강함
PCR 억제제를 포함한 샘플 (생체 시료, 토양, 식품 등)에 최적화 되어 있습니다. Blood, Tissue, Plant 등에서는 gDNA 추출 없이 direct PCR이 가능합니다.
● 멀티플렉스 PCR 가능
다양한 TaqMan ® probe를 사용하여 여러 타겟을 동시에 검출할 수 있어 신속하고 간편하고 정확성이 높은 qPCR이 가능합니다.
● dUTP 함유
본 시약의 2×Buffer for rTth/TTx(DNA)에는 dUTP가 포함되어 있습니다. Uracil-N-Glycosylase(UNG)*를 첨가하면 위양성 검출을 방지할 수 있습니다.
*이 키트에는 UNG가 포함되어 있지 않습니다. 별도 판매의 Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Heat-labile [UNG-101]을 사용할 수 있습니다.
● Hot Start DNA Polymerase
Antiboty를 이용한 Hot start 는 비특이 반응의 억제에 강력한 효과를 나타내며, 열에 의해 쉽게 항체가 불활성되기 때문에, Polymerase의 고온에 의한 손상를 최소화 할 수 있습니다.
원리
실시예
1. 백일해균 IS481 유전자 및 인간 G6PDH 유전자의 검출
백일해균 DNA(150,000, 3,000, 600, 120, 24, 5, 1 카피)를 주형으로 한 IS481 유전자 및 HeLa 세포 total RNA 유래의 cDNA의 5배 희석(4단계)을 주형으로 한 G6PDH 유전자의 증폭을 TaqMan ® Probe를 사용하여 Hot Start TTx (DNA) Kit 및 Taq DNA Polymerase를 기반으로 한 실시간 PCR 시약에서 실시했습니다. 그 결과, 어느 타겟에서도 Hot Start TTx(DNA) Kit로, 효율적인 증폭을 얻을 수 있었습니다. 
2. 고속 사이클에서 실시간 PCR
Hot Start TTx (DNA) Kit 및 Taq DNA Polymerase를 기반으로 한 실시간 PCR 시약에서 TaqMan ® Probe를 사용하여 Africa Pig Collera Virus DNA의 증폭을 고속 사이클로 수행했습니다. |
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기타 실시예
제품 내용
2×Buffer for rTth/TTx (DNA) 1.25mL×2개 Hot Start TTx DNA Polymerase
(4U/ μL)62.5μL×1개 활동 정의:
75℃ 활성 측정 조건에서 30분간에 10nmol의 전체 뉴클레오티드를 산 불용성 분획에 도입하는 효소량을 1U로 한다.
- 기본 반응 조건
(μL) 멸균 증류수 X 2×Buffer for rTth/TTx (DNA) * 10 10μM Primer F 0.6 10μM Primer R 0.6 TaqMan ® Probe 0.4 Hot Start TTx DNA Polymerase 0.25 (Uracil-N-Glycosylase) (0.4unit) 샘플 Y Total Volume 20 Applied Biosystems 기기나 애질런트 사제 기기 등에서 웰간의 형광 강도 및 분주 오차 보정을 위해 패시브 레퍼런스를 사용하는 경우는, 별매품인 50×ROX reference dye[Code No. ROX-101]를 사용 제발. → 각 기종의 ROX 첨가량을 참조하십시오.
*dTTP 대신 dUTP가 포함되어 있습니다.95 ℃ 1min. 95 ℃ 15 초. 40~50 cycles 60 ℃ 30 초. UNG 처리를 수행하는 경우 Predenature 반응 전에 UNG 반응 단계를 설정합니다. UNG의 반응은 각 회사의 권장 조건에 따라 조정하십시오.
- 비고
본 제품은 Chakrabarti Advanced Technology NewCo LLC.에서 US7772383의 라이센스를 받고 판매하고 있습니다.
TaqMan ® , LightCycler ® 는 Roche Diagnostics KK의 등록 상표입니다.
- 원포인트 조언
프라이머의 첨가량은 각각 최종 농도 0.2-0.6μM, TaqMan ® Probe의 첨가량은 최종 농도 0.05-0.3μM를 기준으로 검토해 주십시오. 증폭 효율이 좋지 않은 경우, 첨가량을 늘리는 것으로 퍼포먼스가 향상되는 경우가 있습니다만, 반대로 너무 넣으면 비특이 반응의 원인이 되어 검출 감도가 저하되는 경우가 있습니다.
고속 사이클이나 크루드 샘플로부터의 검출에 있어서, 증폭 효율이 좋지 않은 경우, 효소량을 늘림(최대 2배량)에 의해 개선하는 경우가 있습니다.
Annealing/Extension의 온도는 55~65℃의 범위에서 검토하면 검출 감도 등이 개선되는 경우가 있습니다.
실시간 PCR 장치에 따라 고속 사이클에서 증폭이 가능합니다. Denature 시간을 최단 1초, Annealing/Extension 시간을 최단 1초로 검출할 수 있는 경우도 있으므로, Denature 및 Annealing/Extension 시간을 검토해 주십시오.
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SDS
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법규제 ※ -20℃ |
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| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 50×ROX reference dye | Code No.ROX-101 | 포장 5mL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
제품 내용
2×Buffer for rTth/TTx (DNA) 1.25mL×2개 Hot Start TTx DNA Polymerase
(4U/ μL)62.5μL×1개 활동 정의:
75℃ 활성 측정 조건에서 30분간에 10nmol의 전체 뉴클레오티드를 산 불용성 분획에 도입하는 효소량을 1U로 한다.
- 기본 반응 조건
(μL) 멸균 증류수 X 2×Buffer for rTth/TTx (DNA) * 10 10μM Primer F 0.6 10μM Primer R 0.6 TaqMan ® Probe 0.4 Hot Start TTx DNA Polymerase 0.25 (Uracil-N-Glycosylase) (0.4unit) 샘플 Y Total Volume 20 Applied Biosystems 기기나 애질런트 사제 기기 등에서 웰간의 형광 강도 및 분주 오차 보정을 위해 패시브 레퍼런스를 사용하는 경우는, 별매품인 50×ROX reference dye[Code No. ROX-101]를 사용 제발. → 각 기종의 ROX 첨가량을 참조하십시오.
*dTTP 대신 dUTP가 포함되어 있습니다.95 ℃ 1min. 95 ℃ 15 초. 40~50 cycles 60 ℃ 30 초. UNG 처리를 수행하는 경우 Predenature 반응 전에 UNG 반응 단계를 설정합니다. UNG의 반응은 각 회사의 권장 조건에 따라 조정하십시오.
- 비고
본 제품은 Chakrabarti Advanced Technology NewCo LLC.에서 US7772383의 라이센스를 받고 판매하고 있습니다.
TaqMan ® , LightCycler ® 는 Roche Diagnostics KK의 등록 상표입니다.
- 원포인트 조언
프라이머의 첨가량은 각각 최종 농도 0.2-0.6μM, TaqMan ® Probe의 첨가량은 최종 농도 0.05-0.3μM를 기준으로 검토해 주십시오. 증폭 효율이 좋지 않은 경우, 첨가량을 늘리는 것으로 퍼포먼스가 향상되는 경우가 있습니다만, 반대로 너무 넣으면 비특이 반응의 원인이 되어 검출 감도가 저하되는 경우가 있습니다.
고속 사이클이나 크루드 샘플로부터의 검출에 있어서, 증폭 효율이 좋지 않은 경우, 효소량을 늘림(최대 2배량)에 의해 개선하는 경우가 있습니다.
Annealing/Extension의 온도는 55~65℃의 범위에서 검토하면 검출 감도 등이 개선되는 경우가 있습니다.
실시간 PCR 장치에 따라 고속 사이클에서 증폭이 가능합니다. Denature 시간을 최단 1초, Annealing/Extension 시간을 최단 1초로 검출할 수 있는 경우도 있으므로, Denature 및 Annealing/Extension 시간을 검토해 주십시오.
※ 법규제에 대해서
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