확대 +

Mammalian PowerExpress System ^® 은 유전자 발현 안정화를위한 PowerExpress Element ^® 와 고 발현 세포주의 효율적인 선택을위한 PowerScreen ^® 기술을 사용하여 복제하기 전에 풀 상태에서 생산성을 향상시킵니다. 모노클로닝 후 기존보다 높은 발현 클론을 더 많이 얻을 수 있습니다.
싱글 펩티드용으로서 뿐만이 아니라, L쇄용 벡터·H쇄용 벡터로부터 발현용 재조합 플라스미드를 재구축함으로써, 항체를 고생산하는 세포주를 얻을 수도 있습니다.

● 유전자 발현의 안정화

확대 +

CHO (Chinese Hamster 난소) 세포의 게놈에서 분리 된 유전자 발현 안정화 요소 PowerExpress Element ^® 를 발현 벡터에 배치합니다. PowerExpress Element ^®는 도입 부위의 게놈 환경에 의해 목적 단백질의 발현이 불활성화되는 현상을 줄여 도입된 유전자의 발현을 안정화하고 있습니다.
그림 1은 PowerExpress Element ^® 를 포함한 항체 발현 벡터를 도입하여 취득한 2개의 클론의 계대 안정성을 조사한 결과이다. 각 클론의 1 계대와 20 계대의 발현량비를 종축으로 취했습니다. 항생제를 첨가하여 선택압을 가한 경우(Puromycin(+)), 항생제를 첨가하지 않고 선택압을 가하지 않은 경우(Puromycin(-)), 어느 경우도 1계대와 20계 대의 발현량의 비는 100% 전후가 되어, 20 계대 후에도 발현량이 저하되어 있지 않은 것을 알 수 있습니다.

● 고발현 클론 선택의 효율화

확대 +

약화된 약물 선택 마커를 사용하여 목적 단백질 고발현 균주의 취득 효율을 높이고 있습니다 (PowerScreen ^® 기술).
PowerScreen® 기술은 ^약물 선택 배양 후 발생하는 콜로니의 수를 약 1/10로 줄이고, 많은 콜로니가 관심 단백질을 고도로 발현합니다.

● dhfr 유전자를 이용한 유전자 증폭에 대응

pEHX1.2 플라스미드 벡터는 dhfr 유전자를 코딩하고 있어 MTX(메트렉세이트)에 의한 유전자 증폭이 가능합니다.

● 실험실 규모에서 산업화 규모로 제조까지 다양한 용도

항체 의약 등의 바이오 의약품의 시험제 제조, 시판품 제조용으로서는 물론, 개발 후보품 선택을 위한 다종류 샘플 생산용으로서도 유효합니다.

1. 항체 발현 벡터의 구축

1. 항체 발현 벡터 구축"" />

확대 +

pEHX1.1의 다중 클로닝 사이트에 항체 중쇄 유전자를 삽입하여 pEHC를 얻었다.
또한 pELX2.2의 다중 클로닝 사이트에 항체 경쇄 유전자를 삽입하여 pELC2를 얻었다.
pEHC의 Bgl Ⅱ- Eco RI 사이에 pECL2의 Bgl Ⅱ - Eco RI 단편을 삽입하여 항체 발현 벡터 pELC2 + HC를 얻었다.

2. 항체 발현에 있어서 종래 벡터와 Mammalian PowerExpress System의 비교

2." 抗体発現におけ従来ベクターとMammalian PowerExpress Systemとの比較" />

확대 +

(클론 풀 상태에서의 비교)

항체의 중쇄, 경쇄 유전자를,

1. 기존 벡터
2. PowerExpress ElementR 벡터 (PowerScreenR 기술은 사용하지 않음)
3.Mammalian PowerExpress SystemR 벡터

에, 각각 삽입하고, CHO-K1 세포에 유전자 도입, 약제 선택 배양 후, 선택된 세포의 클로닝을 실시하기 전의 풀 상태에서, 항체의 생산성을 평가했습니다.
Mammalian PowerExpress SystemR 벡터는 기존 벡터에 비해 5배 이상 생산성이 증가하는 것을 확인했습니다.

3. dhfr 유전자를 포함한 본 System에서의 MTX에 의한 선택 효과의 검토

3." dhfr遺伝子を含む本SystemでのMTXによる選択効果の検討" />

확대 +

항체의 중쇄 유전자를 dhfr 유전자를 포함하는 pEHX1.2의 다중 클로닝 사이트에 삽입하여 pEHC2를 얻었다.
실시예 1과 마찬가지로, 경쇄 유전자를 포함하는 pELC2의 Bgl Ⅱ- Eco RI 단편을 pEHC2의 Bgl Ⅱ- Eco RI 부위에 삽입하여 항체 발현 벡터 pELC2+HC2를 얻었다.
pELC2+HC2를 CHO/dhfr-세포에 유전자 도입 후, 약제 선택 배양에 의해 안정 발현 세포 집단을 취득했습니다. 이 세포 집단으로부터 취득한 고 발현 세포 클론을 MTX로 선택 배양을 행한 후, 세포의 클로닝을 실시하기 전의 풀 상태에서 항체의 생산성을 평가하였다. MTX에서의 선택배양으로 최대 3배, 평균 1.8배의 생산성 증가가 가능함을 확인하였다.

<제품 사용 문헌>
N. Yamano et al. et al. J. Biosci. Bioeng. 122 : (2) 226-231 (2016)
https://doi.org/10.1016/j.jbiosc.2016.01.002

S. Yamayoshi et al. EBioMedicine 17 : 182–191 (2017)
https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2017.03.007