ReverTra Ace ^® qPCR RT Master Mix 시리즈는 고효율 역전사 효소 " ReverTra Ace ^® "를 사용하여 개발 된 qPCR 용 역전사 반응 키트입니다. 역전사 반응에 필요한 성분을 모두 포함한 5x 농도의 프리믹스 시약이며, RNA와 물을 첨가하는 것 만으로 신속하게 반응할 수 있습니다.
ReverTra Ace ^® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover는 더욱 강력한 DNA 분해 활성을 가진 gDNA Remover와 함께 제공되며, 역전사 반응 전에 RNA를 처리하여 gDNA가없는 cDNA를 간편하게 합성합니다.  

● qPCR 시약과 높은 적합성
qPCR의 반응물의 영향을 최소한으로 억제하는 조성으로, 최대 20%의 역전사 반응액을 PCR에 첨가한 경우에서도, 고효율을 나타냅니다. 발현량이 적은 mRNA에도 최적입니다.

● 간편, 신속하게 gDNA를 제거
gDNA 제거 시약과 역전사 반응 시약을 첨가하는 것만으로 약 20분의 조작으로, gDNA free cDNA의 합성이 가능합니다.

● 프리믹스 시약
-20℃에서도 얼지 않는 프리믹스 타입의 시약입니다. RNA와 물을 가하는 것만의 조작으로, 간편하고 재현성 있게 cDNA를 합성할 수 있습니다.

● 역전사 반응(-) 컨트롤이 용이

프리믹스 타입의 no-RT Control이 함께 구성되어 있으므로, 역전사 반응(-)의 컨트롤이 가능합니다.

● 폭넓은 Dynamic Range
Oligo dT와 Random Primer의 최적의 혼합비를 가지는 프라이머 믹스로, RNA를 균일하고, 높은 효율로 역전사 반응을 실시할 수 있어, 넓은  Dynamic Range의 결과가 가능합니다.

1. gDNA Remover에 의한 gDNA 제거 효과 확인

gDNA Remover에 의한 gDNA의 제거 효과를 확인하기 위해, 이하의 조건으로 역전사 반응을 실시하고, 이어서 β-Actin 유전자를 타겟으로 실시간 PCR을 실시했습니다. 그 결과, gDNA Remover 처리(+), 역전사효소[RTase](-)<하기 ③>의 조건에서는 증폭이 보이지 않기 때문에, 확실히 gDNA가 제거되고 있는 것이 나타났습니다.



●cDNA 합성 시약 : ReverTra Ace ^® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover [Code No.FSQ-301]
Template :  HeLa total RNA 0.5μg /10μL 반응 조건 : gDNA Remover 첨가(+), 혹은 무첨가(-)의 4 × DN Master Mix를 사용하여 gDNA 제거 반응을 행한 후, 각각을 5 × RT Master Mix II 또는 5 × RT Master Mix II no-RT Control을 사용하여 역전사 반응을 수행합니다.

● qPCR
시약 : THUNDERBIRD ^® SYBR™ qPCR Mix [ Code No.QPS-201 ]
Template : 상기 cDNA 2μL/20μL 반응(10%) Target : ACTB(188bp)
측정 : Applied Biosystems ^® 7900HT

2. 타사품과의 gDNA 제거의 비교

HeLa total RNA에 대 human gDNA를 넣은 실험에서 같은 타입의 타사 키트와의 gDNA 제거 결과의 비교를 실시했습니다. 그 결과, ReverTra Ace ^® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover가 가장 gDNA 제거 능력이 뛰어난 것으로 나타났습니다.


cDNA 합성 시약 : ReverTra Ace ^® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover [Code No.FSQ-301] 및 동종 타사 키트 2종 : HeLa total RNA(0, 1pg, 10pg, 100pg, 1ng, 10ng, 10 , 1μg) + 인간 gDNA 100ng / 20uL 반응 조건 : 각 회사 키트의 권장 조건에 따라 수행

● 실시간 PCR
시약 : THUNDERBIRD ^® SYBR™ qPCR Mix [ Code No.QPS-201 ]
Template : 상기 cDNA 2μL/20μL 반응계(반입량 10%) Target : ACTB(188bp)
측정 : Applied Biosystems ^® 7900HT

실시 예 3 : 타사 제품과의 역전사 반응 효율 (cDNA 합성량)의 비교
실시예 4: RNA량에 대한 반응 효율의 검토
실시 예 5 : cDNA 특이 적 검출 예 - 오염 gDNA 제거 성능 확인 -

1)K.Miyazaki et al., J.Bacteriology. , 185 :2219-2226(2003)
2) A.Nezu et al., Biochem.J. , 263 :59-66(2002)
3) S. Nakashima et al., J. Biochem. (Tokyo) , 131 : 241-246 (2002)
4) S.Atsumi et al., EMBO J. , 20 : 5453-5460 (2001)
5) Y.Yabuta et al., Plant Cell Physiol. , 41 :666-675(2000)
6) S.Lee et al., Gene , 245 : 253-266 (2000)

<제품 사용 문헌>
Takai J. et al., iScience 24, August 20,102836 (2021)
https://doi.org/10.1016/j.isci.2021.102836

cDNA 합성 키트 선택 가이드