본 단백질은 인간 태반에서 유래하는 분자량 51kDa의 재조합 단백질이며, RNaseA와 1:1로 복합체를 형성하여 가역적인 비길항 억제를 나타냅니다.

RT-PCR시의 RTase 반응에 첨가함으로써 안정된 결과를 얻을 수 있습니다.

● 넓은 범위의 pH에서 활성을 유지

DTT 존재하에서는 pH5~8의 범위에서 사용 가능합니다.

1. 재조합형 RNase Inhibitor의 유래의 차이에 의한 억제 효과의 비교

인간 태반 (동양 방제품), 돼지 간, 마우스 유래의 재조합 RNase Inhibitor를 각각 U937 2,500 세포에 첨가한 후, Proteinase K로 세포를 lysis시켰다. Lysate를 주형에 cDNA를 합성하고, qPCR을 수행하였습니다.

그래프는 인간 태반 유래의 재조합 RNase Inhibitor를 사용했을 때 합성된 cDNA량이 가장 많음을 보여줍니다. 이 결과로부터, RNase Inhibitor는 유래에 의해, RNase를 저해하는 효과가 다르고, 인간 태반 유래의 RNase Inhibitor는 다른 동물종 유래의 것보다, RNase를 억제가 효과적이었습니다.

2. qRT-PCR에 RNase Inhibitor 첨가의 효과

RNase 활성이 높은 U937 세포 : 100, 1,000, 10,000 세포를 용해하고 본 제품 5, 20, 40, 80U를 첨가했습니다. 세포 lysate에서 cDNA를 합성하고 qPCR을 수행했습니다.

Ct값을 분석한 결과, RNase Inhibitor의 증가에 따라 Ct값이 감소하는 결과가 되었습니다. 이를 통해 충분한 양의 RNase Inhibitor를 첨가하면 RNA 분해가 억제되어 실험의 정밀도가 높아지는 것을 알 수 있습니다.

3. 열 안정성 확인

RNase Inhibitor를 37-70℃에서 0-60분, 열처리한 후, 활성을 측정했습니다. 그 결과, 50℃, 60분 열처리를 행한 경우에 있어서도 미처리와 변함없는 활성을 유지하고 있는 것을 알 수 있었습니다. 이로부터 본 제품은 반응 온도가 30-50℃의 범위에서 RNase를 안정적으로 억제하는 것으로 나타났다.

1)J. Sambrook, et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual ,Cold Spring Harbor Laboratory (1982)
2)G. Scheele and P. Blackburn, Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 76 :4898-4902(1979)
3)P. Blackburn, et al., J. Biol. Chem ., 252 : 5904-5910(1977)
4) P. Blackburn and B. Jailkhani, J. Biol. Chem ., 254 : 12488-12493 (1979)