miRNAssay™ qPCR RT Master Mix [Code No. MIR-101]은 고효율 역전사효소 "ReverTra Ace ^® "를 사용하여 개발된 miRNA 전용 실시간 PCR 역전사 반응 시약입니다. 스템 루프 RT 프라이머를 이용한 역전사 반응에 최적화되어 특이적이고 감도로 miRNA에서 cDNA를 합성할 수 있습니다.

● Premix cDNA 합성 시약

시약 조제를 간편화 함과 동시에 변동을 억제함으로써 안정적인 결과를 제공.

●나은 특이성

 Step-loop RT 프라이머에 최적화된 조성으로, 성숙한 miRNA만을 특이적으로 cDNA 합성

● 폭넓은 다이나믹 레인지

낮은 카피의 타겟으로부터,  효율적이고 특이성 있게, cDNA를 합성 가능.

● 우수한 시약 적합성

다양한 실시간 PCR 시약과 함께 사용할 수 있습니다. 시판되는 Step-loop RT Primer에 적용 가능.

본 제품은 루프형 구조를 가진 RT 프라이머(스템 루프 RT 프라이머)를 사용하여 miRNA를 역전사하는 시약입니다. 스템 루프 RT 프라이머를 사용하면miRNA를 효율적으로 역전사할 수 있으며 역전사와 동시에 그 사슬을 늘릴 수 있습니다.

1. 상동성이 높은 miRNA를 이용한 특이성 확인

Yeast Total RNA 100ng에 let-7a, let-7g, miR-98의 합성 RNA 10 ⁵ copy를 혼합하고, miRNAssay™ qPCR RT Master Mix와 타사 시약으로 cDNA 합성을 수행했습니다. 합성된 cDNA를 주형에 실시간 PCR을 실시하여 그 검출 효율을 비교했습니다. 검출 효율은 100%의 miRNA가 있다고 가정하고 Ct 값의 차이로부터 계산하였다. 그 결과, 본 제품에서는 상동성이 높은 miRNA에서도 높은 정밀도로 식별할 수 있는 것이 밝혀졌습니다.

2. total RNA 10배 희석 계열(1pg~100ng)로부터의 cDNA 합성

miRNAssay™ qPCR RT Master Mix와 let-7a 특이적인 스템 루프 RT 프라이머를 사용하여, HeLa 세포 유래의 total RNA 10배 희석 계열(1pg~100ng)로부터 cDNA 합성을 실시했습니다. 그 역전사 용액 1/10량을 실시간 PCR에 제공하여 정량성을 확인했습니다. 마찬가지로 타사 역전사 시약에서도 let-7a의 cDNA 합성을 실시하여 실시간 PCR 분석을 실시했습니다.
그 결과, 본제품에서는 RT(-)의 컨트롤인 no-RT Control에서는 증폭 시그널은 검출되지 않고, 1pg~100ng까지의 폭넓은 범위에서 let-7a의 정량적인 검출이 가능했습니다.

실시예 3 배양 세포 라이세이트로부터의 miRNA 검출
실시예 4 엑소좀 라이세이트로부터의 miRNA 검출