HOMEReverse transcription kit [high efficiency]
ReverTra Ace® [TRT-101]
가격표
역전사 효소
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 ReverTra Ace | Code No.TRT-101 | 포장 10,000U×1개 | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
| 품명 ReverTra Ace | Code No.TRT-101X5 | 포장 (10,000U×1개)×5 | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
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SDS
|
법규제 ※ 없음 |
| 품명 ReverTra Ace | Code No.TRT-101X10 | 포장 (10,000U×1개)×10 | 저장 온도 -20℃ | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ 없음 |
용도
● one-stranded cDNA synthesis
설명
RNaseH 활성은 cDNA 합성에 있어서 주형/프라이머인 DNA-RNA hybrid의 RNA를 분해하여 반응 효율 저하의 원인으로 알려져 있습니다. ReverTra Ace ® 는 M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus) RTase 유전자의 RNaseH activity 도메인의 point mutation으로 활성을 감소 시켰습니다.
또한 RNA의 복잡한 구조는 RTase 반응을 방해하고 cDNA 합성을 어렵게 만듭니다. DNA 합성 도메인에 point mutation을 하여 반응 효율 및 고온 반응성을 향상 시킴으로써 고온에서의 반응을 가능하게 하였습니다. 따라서 반응 온도를 높임으로써 RNA의 복잡한 구조를 완화하고 RTase에 의한 cDNA 합성 반응을 진행하게 합니다. 
본 효소는 기존의 deletion 타입의 M-MLV RTase RNaseH - 에 비해 약 4배의 비활성을 가지며, 고효율 cDNA 합성에 적합합니다.
특징
●신장성 향상
M-MLV RTase의 RNaseH 활성을 제거함으로써 신장성이 크게 향상되었습니다.
●반응 효율·고온 반응성이 향상
M-MLV RTase의 DNA 합성 도메인의 변형 및 반응 조성의 개선으로 고온 반응성 및 반응 효율이 향상되었습니다.
●RT-PCR에 최적
다양한 조건에서 역전사 반응을 수행할 수 있으며, 특히 RT-PCR에 적합합니다.
원리
실시예
1.42~60℃에서의 cDNA 합성 반응
poly(A) Tail을 가진 9.49, 7.46, 4.40, 2.37, 1.35kb의 RNA 0.4μg을 주형에 42~60℃의 반응 온도에서 oligo(dT) 20 25pmoles를 프라이머로 하고, 효소 100U를 사용하여 30min. cDNA 합성 반응을 실시했습니다.
그 결과 ReverTra Ace® 에서는 42℃ 및 50℃에서 9.49kb, 55℃에서 4.4kb, 60℃에서 2.37kb의 cDNA의 합성이 확인되었습니다.
2. cDNA 합성 효율의 비교
i 
n vitro 에서 합성한 G3PDH의 RNA 10 2 ~ 10 5 copies를 주형으로 G3PDH의 Reverse Primer를 사용하고, 42℃, 20min.에서 cDNA 합성 반응을 행한 후, G3PDH의 Forward Primer를 첨가하여 rTaq DNA Polymerase[Code No.TAP-201] 에서 PCR을 실시했습니다.
그 결과, ReverTra Ace ® 에서는 10 2 copies의 RNA를 이용하여 cDNA 합성을 실시한 것에 대해서도 고효율로 증폭을 실시할 수 있었습니다.
실시예 3: 14kb의 cDNA 합성 반응
실시 예 4 : GC-rich 타겟으로부터의 cDNA 합성
실시예 5: 반응 효율·신장 성능과 역전사 반응 온도의 검토
기타 실시예
참고 문헌
1)K.Miyazaki et al., J.Bacteriology ., 185 :2219-2226(2003)
2) A.Nezu et al., Biochem.J ., 263 :59-66(2002)
3) S. Nakashima et al., J. Biochem . (Tokyo), 131 : 241-246 (2002)
4) S.Atsumi et al., EMBO J. , 20 :5453-5460(2001)
5) Y.Yabuta et al., Plant Cell Physiol ., 41 :666-675(2000)
6) S.Lee et al., Gene , 245 :253-266(2000)
상품 사용 문헌
1) T. Ikeda et al., Endocrinology 142 (4): 1419-1426.(2001)
https://doi.org/10.1210/endo.142.4.8070
2) S. Ohuchi et al., Nucleic AcidsResearch , 30 (15): 3473-3480.(2002)
https://doi.org/10.1093/nar/gkf453
3)K. Minami et al., Toxicological Sciences 87 (1): 296-305.(2005)
https://doi.org/10.1093/toxsci/kfi235
4) I. Nishimura et al., Endocrinology , 149 (2): 774-782.(2008)
https://doi.org/10.1210/en.2007-0759
제품 내용
ReverTra Ace ® (100U/μL)
5×버퍼* (TRT-1B)100μL×1개
1mL×1개*5×버퍼 중에는 dNTPs가 포함되어 있지 않습니다.
모양:
20mM Tris-HCl (pH7.5)
100mM NaCl
0.1mM EDTA
1mM DTT
0.01% Nonidet ® P-40
50% Glycerol
활동 정의:
Poly(rA):Oligo(dT) 20을 주형/프라이머로서 42℃, 10분에 1nmole의 dTTP를 산 불용성 침전물에 도입하는 효소량을 1U로 합니다.
순도:
본 효소 50U와 0.5μg의 MS2 RNA를 42℃에서 1시간 반응시켜도 RNA의 전기영동 패턴은 변화하지 않습니다.
기원:
E.coli 재조합체
- 기본 반응 조건
멸균 증류수 XμL
주형 RNA
total RNA 0.5-5μg
poly(A)+ RNA 50-500ng
Primer
oligo(dT) 5pmoles
랜덤 25pmoles
gene specific 5pmoles
5×버퍼 4μL
10mM dNTPs 2μL(1mM)
ReverTra Ace ® (100U/μL) 1μL(100U)
Total Volume 20μL
30℃, 10min*
42℃, 20-60min.
99℃, 5min.
*이 반응은 Ramdom Primer의 경우에만 필요합니다.
- 원포인트 조언
●반응 온도에 대해 본 효소는 통상 42℃에서 반응을 실시합니다. RNA의 고차 구조를 완화시키기 위해 반응 온도를 올릴 때 프라이머의 어닐링 효율에 유의해야합니다. Random 프라이머를 사용하는 경우, 25~30℃에서 10분 동안 인큐베이션한 후 반응을 수행합니다.
●mRNA의 열변성에 대해서
mRNA의 고차 구조 완화 때문에 일단 mRNA를 열변성시킨 후 반응을 시작하면 효율이 올라갈 수 있습니다. 그 때는, 열변성 처리 후에 본 효소를 첨가합니다.
FAQ는 이쪽 →
English Page
관련상품
ReverTra Ace[TRT-101]파트 단품
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 5×RT Buffer | Code No.TRT-1B | 포장 1mL | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 Oligo(dT)20 Primer | Code No.FSK-201 | 포장 1nmole/0.1mL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 Random Primer(9mer) | Code No.FSK-301 | 포장 2.5nmoles/0.1mL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
dATP, dGTP, dCTP, dTTP 혼합 용액
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 dNTP Mixture(A, C, G, T each 10mM) | Code No.NTP-301 | 포장 0.2mL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양
|
SDS
|
법규제 ※ -20℃ |
RNA 분해 효소 억제제
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 RNase Inhibitor, recombinant | Code No.SIN-201 | 포장 2,500U×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS
|
법규제 ※ -20℃ |
cDNA 합성 키트
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 ReverTra Ace -α-* 컨트롤 없음* | Code No.FSK-101F | 포장 100회용 | 저장 온도 | 설명서 사양
|
SDS | 법규제 ※ -20℃ |
제품 내용
ReverTra Ace ® (100U/μL)
5×버퍼* (TRT-1B)100μL×1개
1mL×1개*5×버퍼 중에는 dNTPs가 포함되어 있지 않습니다.
모양:
20mM Tris-HCl (pH7.5)
100mM NaCl
0.1mM EDTA
1mM DTT
0.01% Nonidet ® P-40
50% Glycerol
활동 정의:
Poly(rA):Oligo(dT) 20을 주형/프라이머로서 42℃, 10분에 1nmole의 dTTP를 산 불용성 침전물에 도입하는 효소량을 1U로 합니다.
순도:
본 효소 50U와 0.5μg의 MS2 RNA를 42℃에서 1시간 반응시켜도 RNA의 전기영동 패턴은 변화하지 않습니다.
기원:
E.coli 재조합체
- 기본 반응 조건
멸균 증류수 XμL
주형 RNA
total RNA 0.5-5μg
poly(A)+ RNA 50-500ng
Primer
oligo(dT) 5pmoles
랜덤 25pmoles
gene specific 5pmoles
5×버퍼 4μL
10mM dNTPs 2μL(1mM)
ReverTra Ace ® (100U/μL) 1μL(100U)
Total Volume 20μL
30℃, 10min*
42℃, 20-60min.
99℃, 5min.
*이 반응은 Ramdom Primer의 경우에만 필요합니다.
- 원포인트 조언
●반응 온도에 대해 본 효소는 통상 42℃에서 반응을 실시합니다. RNA의 고차 구조를 완화시키기 위해 반응 온도를 올릴 때 프라이머의 어닐링 효율에 유의해야합니다. Random 프라이머를 사용하는 경우, 25~30℃에서 10분 동안 인큐베이션한 후 반응을 수행합니다.
●mRNA의 열변성에 대해서
mRNA의 고차 구조 완화 때문에 일단 mRNA를 열변성시킨 후 반응을 시작하면 효율이 올라갈 수 있습니다. 그 때는, 열변성 처리 후에 본 효소를 첨가합니다.
FAQ는 이쪽 →
English Page
※ 법규제에 대해서
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