cDNA synthesis kit [high efficiency]

ReverTra Ace -α-® [ FSK-101F]

가격표

cDNA 합성 키트

품명 Code No. 포장 저장 온도 설명서 사양 SDS 법규제
품명 ReverTra Ace -α-* 컨트롤 없음* Code No.FSK-101F 포장 100회용 저장 온도 -20℃ 설명서 사양 SDS 법규제 없음

용도

●RT-PCR용 cDNA synthesis kit

설명

본 키트에서 사용하고 있는 ReverTra Ace ® 는 고온 반응성과 반응 효율을 향상시킨 개변형 M-MLV RTase(RNaseH - )이며, 기존의 RTase에 비해 긴 cDNA의 합성이 가능합니다(14kb까지 cDNA 합성 가능).

특징

고효율

고효율 역전사효소 인 ReverTra Ace ® 를 사용하여 고효율 cDNA 합성을 할 수 있습니다.

넓은 응용 범위

Random Primer, Oligo dT Primer 및 Specific Primer를 이용한 역전사 반응이 가능하며, 다양한 경우에 따라 사용할 수 있습니다.

원리

실시예

PCR에 Polymerase 비교

ReverTra Ace -α- ® 를 이용하여 HeLa Total RNA(1μg)를 template 으로 하여 cDNA 합성 후, 다양한 PCR Polymerase를 이용하여 β-actin(838bp)을 타겟으로 하는 PCR을 실시하였다. cDNA 합성은 20μL 로 반응하여 42℃에서 20min., 그 후 99℃에서 5min.처리하였다. 그 후, cDNA 합성 반응액에 80μL의 PCR 용액을 가하여 최종 100μL로 한 후, PCR을 수행하였다.

그 결과, 모든 Polymerase에서 증폭을 확인할 수 있었고, ReverTra Ace-α- ® 의 역전사 산물은 다양한 PCR 효소를 이용한 증폭에 적용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

( 실시예 자세한 것은 이쪽 )

기타 실시예

참고 문헌

1) Hatta M. et al., Intl. J. Mol. Med ., 9 : 147-152 (2002)

<제품 사용 문헌>
1) WANG Y. et al., Mol. Med. Rep. 17 : 3690-3696 (2018)


제품 내용

ReverTra Ace ® 100μL×1개
5×RT Buffer* [TRT-1B] 400μL×1개
Random Primer (9mer)[FSK-301] 100μL×1개
Oligo(dT) 20 Primer
[FSK-201]
100μL×1개
10mM dNTPs [NTP-301] 200μL×1개
RNase Inhibitor 100μL×1개
RNase Free H 2 O 1.2ml×1개

*5×RT Buffer는 ReverTra Ace ® 용 Buffer와 동일한 조성입니다.
G3PDH는 가짜 유전자가 많기 때문에, 샘플에 이용하는 경우에는, 샘플을 Dnase 처리하는 것을 추천합니다.

기본 반응 조건


멸균 증류수 XμL
주형 RNA
total RNA 100-1000ng
mRNA 10-100ng
Primer
Oligo (dT) 20 Primer 1μL
Random Primer 1μL
Specific Primer 10pmoles*
5×RT Buffer 4μL
10mM dNTPs 2μL
ReverTra Ace® 1μL
RNase Inhibitor 1μL
Total Volume 20μL

*이 프라이머는 PCR용의 3'Primer(안티센스 가닥과 같은 서열이 됩니다)와 같습니다.

30℃, 10min.**
42℃, 20min.
99℃, 5min.

**이 반응은 Random Primer의 경우에만 필요합니다.

원포인트 조언

● PCR 반응액으로의 반입량
Taq 기반의 PCR 효소 및 KOD Dash의 반응에는 최대 20%, KOD-Plus-series 및 KOD FX series의 반응에는 최대 4%, 바람직하게는 2% 이하의 역전사 반응액을 사용하는 것을 추천합니다.

● 주형 RNA
주형 RNA로는 total RNA, mRNA, tRNA 및 rRNA를 사용할 수 있습니다. 두 경우 모두 순도가 높은 샘플을 사용하면 더 나은 결과를 얻을 수 있습니다.

●컨트롤 계 샘플을 처음으로 RT-PCR하는 경우에는, 컨트롤 실험도 동시에 실시하는 것을 추천합니다.

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품명 RNase Inhibitor, recombinant Code No.SIN-201 포장 2,500U×1개 저장 온도 설명서 사양 SDS 법규제 -20℃

제품 내용

ReverTra Ace ® 100μL×1개
5×RT Buffer* [TRT-1B] 400μL×1개
Random Primer (9mer)[FSK-301] 100μL×1개
Oligo(dT) 20 Primer
[FSK-201]
100μL×1개
10mM dNTPs [NTP-301] 200μL×1개
RNase Inhibitor 100μL×1개
RNase Free H 2 O 1.2ml×1개

*5×RT Buffer는 ReverTra Ace ® 용 Buffer와 동일한 조성입니다.
G3PDH는 가짜 유전자가 많기 때문에, 샘플에 이용하는 경우에는, 샘플을 Dnase 처리하는 것을 추천합니다.

기본 반응 조건


멸균 증류수 XμL
주형 RNA
total RNA 100-1000ng
mRNA 10-100ng
Primer
Oligo (dT) 20 Primer 1μL
Random Primer 1μL
Specific Primer 10pmoles*
5×RT Buffer 4μL
10mM dNTPs 2μL
ReverTra Ace® 1μL
RNase Inhibitor 1μL
Total Volume 20μL

*이 프라이머는 PCR용의 3'Primer(안티센스 가닥과 같은 서열이 됩니다)와 같습니다.

30℃, 10min.**
42℃, 20min.
99℃, 5min.

**이 반응은 Random Primer의 경우에만 필요합니다.

원포인트 조언

● PCR 반응액으로의 반입량
Taq 기반의 PCR 효소 및 KOD Dash의 반응에는 최대 20%, KOD-Plus-series 및 KOD FX series의 반응에는 최대 4%, 바람직하게는 2% 이하의 역전사 반응액을 사용하는 것을 추천합니다.

● 주형 RNA
주형 RNA로는 total RNA, mRNA, tRNA 및 rRNA를 사용할 수 있습니다. 두 경우 모두 순도가 높은 샘플을 사용하면 더 나은 결과를 얻을 수 있습니다.

●컨트롤 계 샘플을 처음으로 RT-PCR하는 경우에는, 컨트롤 실험도 동시에 실시하는 것을 추천합니다.

※ 법규제에 대해서

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