cDNA synthesis kit [high efficiency]
ReverTra Ace -α-® [ FSK-101F]
가격표
용도
●RT-PCR용 cDNA synthesis kit
설명
본 키트에서 사용하고 있는 ReverTra Ace ® 는 고온 반응성과 반응 효율을 향상시킨 개변형 M-MLV RTase(RNaseH - )이며, 기존의 RTase에 비해 긴 cDNA의 합성이 가능합니다(14kb까지 cDNA 합성 가능).
특징
● 고효율
고효율 역전사효소 인 ReverTra Ace ® 를 사용하여 고효율 cDNA 합성을 할 수 있습니다.
● 넓은 응용 범위
Random Primer, Oligo dT Primer 및 Specific Primer를 이용한 역전사 반응이 가능하며, 다양한 경우에 따라 사용할 수 있습니다.
원리
실시예
PCR에 Polymerase 비교
ReverTra Ace -α- ® 를 이용하여 HeLa Total RNA(1μg)를 template 으로 하여 cDNA 합성 후, 다양한 PCR Polymerase를 이용하여 β-actin(838bp)을 타겟으로 하는 PCR을 실시하였다. cDNA 합성은 20μL 로 반응하여 42℃에서 20min., 그 후 99℃에서 5min.처리하였다. 그 후, cDNA 합성 반응액에 80μL의 PCR 용액을 가하여 최종 100μL로 한 후, PCR을 수행하였다.
그 결과, 모든 Polymerase에서 증폭을 확인할 수 있었고, ReverTra Ace-α- ® 의 역전사 산물은 다양한 PCR 효소를 이용한 증폭에 적용할 수 있음을 확인할 수 있었다.
( 실시예 자세한 것은 이쪽 )
기타 실시예
참고 문헌
1) Hatta M. et al., Intl. J. Mol. Med ., 9 : 147-152 (2002)
<제품 사용 문헌>
1) WANG Y. et al., Mol. Med. Rep. 17 : 3690-3696 (2018)
제품 내용
ReverTra Ace ® 100μL×1개 5×RT Buffer* [TRT-1B] 400μL×1개 Random Primer (9mer)[FSK-301] 100μL×1개 Oligo(dT) 20 Primer
[FSK-201]100μL×1개 10mM dNTPs [NTP-301] 200μL×1개 RNase Inhibitor 100μL×1개 RNase Free H 2 O 1.2ml×1개 *5×RT Buffer는 ReverTra Ace ® 용 Buffer와 동일한 조성입니다.
G3PDH는 가짜 유전자가 많기 때문에, 샘플에 이용하는 경우에는, 샘플을 Dnase 처리하는 것을 추천합니다.
- 기본 반응 조건
멸균 증류수 XμL
주형 RNA
total RNA 100-1000ng
mRNA 10-100ng
Primer
Oligo (dT) 20 Primer 1μL
Random Primer 1μL
Specific Primer 10pmoles*
5×RT Buffer 4μL
10mM dNTPs 2μL
ReverTra Ace® 1μL
RNase Inhibitor 1μL
Total Volume 20μL
*이 프라이머는 PCR용의 3'Primer(안티센스 가닥과 같은 서열이 됩니다)와 같습니다.
30℃, 10min.**
42℃, 20min.
99℃, 5min.
**이 반응은 Random Primer의 경우에만 필요합니다.
- 원포인트 조언
● PCR 반응액으로의 반입량
Taq 기반의 PCR 효소 및 KOD Dash의 반응에는 최대 20%, KOD-Plus-series 및 KOD FX series의 반응에는 최대 4%, 바람직하게는 2% 이하의 역전사 반응액을 사용하는 것을 추천합니다.
● 주형 RNA
주형 RNA로는 total RNA, mRNA, tRNA 및 rRNA를 사용할 수 있습니다. 두 경우 모두 순도가 높은 샘플을 사용하면 더 나은 결과를 얻을 수 있습니다.
●컨트롤 계 샘플을 처음으로 RT-PCR하는 경우에는, 컨트롤 실험도 동시에 실시하는 것을 추천합니다.
관련상품
ReverTra Ace[TRT-101]파트 단품
품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
---|---|---|---|---|---|---|
품명 5×RT Buffer | Code No.TRT-1B | 포장 1mL | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
dATP, dGTP, dCTP, dTTP 혼합 용액
품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
---|---|---|---|---|---|---|
품명 Oligo(dT)20 Primer | Code No.FSK-201 | 포장 1nmole/0.1mL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
---|---|---|---|---|---|---|
품명 Random Primer(9mer) | Code No.FSK-301 | 포장 2.5nmoles/0.1mL×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ -20℃ |
역전사 효소
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix
실시간 PCR용 cDNA 합성 키트
제품 내용
ReverTra Ace ® 100μL×1개 5×RT Buffer* [TRT-1B] 400μL×1개 Random Primer (9mer)[FSK-301] 100μL×1개 Oligo(dT) 20 Primer
[FSK-201]100μL×1개 10mM dNTPs [NTP-301] 200μL×1개 RNase Inhibitor 100μL×1개 RNase Free H 2 O 1.2ml×1개 *5×RT Buffer는 ReverTra Ace ® 용 Buffer와 동일한 조성입니다.
G3PDH는 가짜 유전자가 많기 때문에, 샘플에 이용하는 경우에는, 샘플을 Dnase 처리하는 것을 추천합니다.
- 기본 반응 조건
멸균 증류수 XμL
주형 RNA
total RNA 100-1000ng
mRNA 10-100ng
Primer
Oligo (dT) 20 Primer 1μL
Random Primer 1μL
Specific Primer 10pmoles*
5×RT Buffer 4μL
10mM dNTPs 2μL
ReverTra Ace® 1μL
RNase Inhibitor 1μL
Total Volume 20μL
*이 프라이머는 PCR용의 3'Primer(안티센스 가닥과 같은 서열이 됩니다)와 같습니다.
30℃, 10min.**
42℃, 20min.
99℃, 5min.
**이 반응은 Random Primer의 경우에만 필요합니다.
- 원포인트 조언
● PCR 반응액으로의 반입량
Taq 기반의 PCR 효소 및 KOD Dash의 반응에는 최대 20%, KOD-Plus-series 및 KOD FX series의 반응에는 최대 4%, 바람직하게는 2% 이하의 역전사 반응액을 사용하는 것을 추천합니다.
● 주형 RNA
주형 RNA로는 total RNA, mRNA, tRNA 및 rRNA를 사용할 수 있습니다. 두 경우 모두 순도가 높은 샘플을 사용하면 더 나은 결과를 얻을 수 있습니다.
●컨트롤 계 샘플을 처음으로 RT-PCR하는 경우에는, 컨트롤 실험도 동시에 실시하는 것을 추천합니다.
※ 법규제에 대해서
독독물 및 극물 단속법 [의약용 외독물]
극독물 및 극물 단속법 [의약용 외극물]
위험소방법[위험물]
신구입시에 신청서의 제출이 필요한 제품
없음상기 법령이나 신청서의 제출에 해당하지 않는 제품
국가국민보호법[독소]
세트카르타헤나 법 (유전자 재조합 생물 등의 사용 등의 규제에 의한
생물의 다양성 확보에 관한 법률)
PPRTR법(화학물질 배출 파악 관리 촉진법) [신고 의무 물질]
노동노동안전보건법[통지 또는 표시의무물질]