ReverTra Ace ^® qPCR RT 키트 [Code No. FSQ-101]는 고효율 역전사 효소 " ReverTra Ace ^® "를 사용하여 반응 효율이 우수합니다. 또한, 리얼타임 PCR의 반응에서 PCR 산물의 영향을 최소한으로 억제하도록 제작 되어 최대 20%(V/V)를 포함한 경우에 있어서도 우수한 증폭 직선성을 나타냅니다. 따라서 low copy mRNA 에 적합합니다. 또한 키트 구성도 간소화되어 있어 보다 간편하게 작업을 진행할 수 있습니다.

● 폭넓은 Dynamic Range
Oligo dT와 Random Primer의 최적의 혼합비를 가지는 프라이머 믹스로, RNA를 균일하고, 높은 효율로 역전사 반응을 실시할 수 있어, 넓은  Dynamic Range의 결과가 가능합니다.

● 실시간 PCR 시약과의 높은 적합성

qPCR의 반응물의 영향을 최소한으로 억제하는 조성으로, 최대 20%의 역전사 반응액을 PCR에 첨가한 경우에서도, 고효율을 나타냅니다. 발현량이 적은 mRNA의 고감도 검출에 적합합니다.

1. 타사품과의 cDNA 합성량의 비교

HeLa 세포 유래의 total RNA 100ng을 주형으로 하여 각 회사 키트를 각각의 권장 조건에 따라 사용하여 역전사 반응을 실시하였다. 실시간 PCR 반응액(당사 SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix [ Code No. QPK-201 ] 사용)에 cDNA를 각각 1%(V/V)로 첨가하고, 실시간 PCR에 의한 β-Actin과 Polymerase ε의 cDNA량의 정량을 실시했습니다. 그 결과,이 키트를 사용하면 두 대상 모두에서 가장 높은 수율을 얻을 수 있음이 밝혀졌습니다.

2. RNase H 처리 유무에 의한 검출 감도 비교

ReverTra Ace ^® qPCR RT 키트와 RNase H 별첨형 B사 키트를 사용하여 각각 권장 프로토콜에 따라 역전사 반응을 실시하였다(B사 키트는 RNase H 처리 있음/없음 모두 실시). 실시예 1과 동일한 방법을 이용하여 β-Actin의 증폭을 비교한 결과, B사 키트에서는 RNase H 처리를 하지 않은 경우에는 검출 감도의 대폭적인 저하가 인정되었지만, ReverTra Ace ^® qPCR RT Kit에 의한 반응은 추가적인 RNase H 처리 없이도 높은 검출 감도를 나타냈다. 여기에는 나타내지 않지만, 본 키트를 사용한 경우는, RNase H 처리한 경우도 감도는 동등했습니다.

3. 주형 RNA량의 첨가량에 대한 합성 효율의 검토

ReverTra Ace ^® qPCR RT Kit의 10μL 반응계에 대해, HeLa total RNA를 0.5μg – 0.5pg의 범위에서 각각 첨가하고, 실시예 3과 동일한 방법을 이용하여 cDNA 합성량의 비교를 실시하였다. 그 결과, 검토를 실시한 전 범위에 있어서 주형 RNA량과 cDNA 수량은 높은 상관을 나타내고, 주형 RNA의 다과에 관계없이 안정적으로 높은 cDNA 합성 효율을 유지하고 있는 것이 나타났습니다. 이것은 표적 농도가 다른 시료간에 있어서도 역전사 효율의 변화가 매우 적은 것을 시사하고 있어 정량 결과의 오차를 최소한으로 억제할 수 있을 것으로 기대됩니다.

실시 예 4 : 희귀 발현 유전자의 검출 비교 예

1) M. Hatta et al., Intl. J. Mol. Med ., 9 : 147-152(2002)
2)K.Miyazaki et al., J.Bacteriology ., 185 :2219-2226(2003)
3) A. Nezu et al., Biochem . J., 263 : 59-66 (2002)
4) S.Nakashima et al., J.Biochem .(Tokyo), 131 :241-246(2002)
5) S.Atsumi et al., EMBO J., 20 :5453-5460(2001)
6)Y.Yabuta et al., Plant Cell Physiol ., 41 :666-675(2000)
7) S.Lee et al., Gene , 245 :253-266(2000)