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리포터 분석용 시약
| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 품명 Tripluc Luciferase Assay Reagent | Code No.MRA-301 | 포장 10mL×1개 | 저장 온도 -80℃ | 설명서 사양
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SDS
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법규제 ※ |
| 품명 Tripluc Luciferase Assay Reagent | Code No.MRA-301X5 | 포장 (10mL×1개)×5 | 저장 온도 -80℃ | 설명서 사양
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SDS
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법규제 ※ |
용도
● 리포터 분석
설명
리포터 분석은 유전자의 전사 조절 서열(프로모터 등)을 리포터 유전자와 연결하여 세포 내에서 발현된 리포터 효소의 활성을 지표로 유전자 발현을 평가하는 방법입니다. 
MultiReporter Assay System - Tripluc ® -은 (독) 산업 기술 종합 연구소 오미야 선생님의 그룹에서 개발 된 녹색 (SLG), 오렌지 (SLO) 및 적색 (SLR) 발광의 3 색 루시퍼 라제를 사용한 멀티 리포터 분석 시스템입니다. 이들 루시퍼라제는 모두 D-루시페린을 발광 기질로 이용하므로, 색분리 측정에 의해 최대 3개의 리포터 효소의 활성을 간편하고 동시에 분석할 수 있습니다. 하나의 리포터를 내부 표준에 사용해도 두 테스트 서열의 전사 조절을 측정할 수 있습니다.
Tripluc ® Luciferase Assay Reagent는 MultiReporter Assay System – Tripluc ® – 분석에 최적화된 측정 시약입니다. 
특징
● 3 색으로 분석 가능
녹색(SLG), 주황색(SLO) 및 적색(SLR) 발광의 3색 루시퍼라제를 이용한 3색으로의 평가(2종류의 피검배열+인터널 컨트롤 등)가 가능합니다.
여러 유전자 발현을 동시에 평가할 수 있으며, 보다 엄격한 실험이 가능합니다.
● 1단계 분석
종래의 2액형의 검출 시약에서는, 세포 용해와 발광 반응을 따로 따로 실시하기 때문에, 번잡한 조작이 필요했습니다. 본 시약에서는 배양액에 시약을 첨가하고 10분간 인큐베이션하는 것만으로 분석이 가능합니다.
● 안정된 발광
-
시약 조성을 최적화하여 안정적인 발광이 가능합니다. 단일 튜브에서의 분석 외에도 멀티 웰 플레이트에서의 분석에 이상적입니다.
원리
실시예
1.3 색 분리 모델 실험
"MultiReporter Assay System -Tripluc-"의 각각 녹색, 주황색, 적색으로 발광시키는 루시퍼 라제를 발현하는 벡터 3 종 (SLG, SLO, SLR)을 혼합하고, HeLa S3 세포로 형질 감염시키고, 3 색의 루시퍼 라제 발광을 분리 계측했습니다. 이때 SLG는 내부표준으로서 일정량 더해 SLO, SLR의 혼합비를 바꾸고 있습니다. 측정 값을 SLG 값으로 표준화하고 플롯했습니다. 
이것으로부터, 각각의 색이 정량적으로 계측되고 있는 것을 알 수 있습니다.
실시 예 2 : 전사 인자 AP1, NFκB 활성화의 동시 분석
기타 실시예
참고 문헌
1) Y. Nakajima et al., Biotechniques , 38 : 891-894(2005)
2) 나카지마 요시히로 등, 생명 공학 저널, 7-8 , 453-455(2005)
3) "동물 실험 대체를위한 생체 재료 장치"(씨엠시 출판), 235-243
4) R. V Vadim et al., Biochemistry , 38 : 8271-8279 (1999)
5) Y. Ohmiya et al., Sci. Rept. Yokosuka City Mus. 47 : 31-3(2000)
6) V. Vadim et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 :1286-1291(2001)
7) VR Viviani et al., Photochem.Photobiol. , 76 : 538-544(2002)
8) Y. Nakajima, Biosci. Biotechnol. Biochem. 68 : 948-951(2004)
9) Y. Nakajima et al., FEBS Letters 565 : 122-126(2004)
10) 오미야 카츠히로, 생화학, 76 : 5-15(2004)
<제품 사용 문헌>
S. Hirano et al., Toxicol. Appl. Pharmacol. : 249, 8–15 (2010)
https://doi.org/10.1016/j.taap.2010.08.019
Y. Kimura et al., Toxicol. Vitr. : 28 , 759–768 (2014)
S. Wakuri et al. Anal. Biochem .: 522 , 18-29 (2017)
https://doi.org/10.1016/j.ab.2017.01.015
K. Morikawa et al. Biochem. Biophys. Rep .: 18 , 1006-45 (2019)
S. Fukuda et al. Biochem. Biophys. Res . Commun. 508 , 928-933 (2019)
https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2018.12.027
제품 내용
Assay reagent *
*96 웰 플레이트의 경우 Assay Reagent 10 mL는 100 반응에 해당합니다.
- 주의사항
MultiReporter Assay System -Tripluc® - 벡터 는 본 제품에 포함되지 않습니다.
본제품의 구입시에는, 특허의 관계상 구입 신청서가 필요합니다.
아래 배너를 클릭하여 신청해 주시기를 부탁드립니다.
- 기본 반응 조건
MultiReporter Assay System - Tripluc ® -의 루시퍼 라제 유전자가 도입 된 세포 배양 *
↓
세포를 CO2 인큐베이터에서 꺼내 실온으로 되돌린다.
↓
각 웰에 세포 배양액과 동일한 양의 본 시약을 첨가
↓
실온에서 10분 동안 인큐베이션하여 세포를 완전히 용해
↓
루미노미터로 측정
* 투과율 설정을 위해 각 색상의 루시퍼 라제 유전자 플라스미드를 단독으로 트랜 스펙 션 한 샘플을 함께 준비하십시오.
- 원포인트 조언
● 본 시스템의 측정에는 색분리 기능이 있는 루미노미터를 사용해야 합니다. ARVOMX (파킨 엘머 사제) 등을 사용할 수 있습니다.
● 세포 배양 후, 그대로 발광 시약을 더해 측정하는 경우, 사용의 측정 기기에 적합한 백색 불투명 플레이트로 배양을 실시해 주세요.
●보다 정밀도가 높은 측정을 위해 SLG, SLO, SLR의 발광량이 가능한 한 동일한 레벨이 되도록 플라스미드의 혼합량을 조정해 주십시오(50배 이내). 이때 내부 표준으로는 SLG의 사용을 권장합니다. 내부 표준으로 SLG를 사용하면 많은 경우 내부 표준으로 첨가하는 플라스미드의 양을 억제하고 피험 서열에 연결된 SLO, SLR의 혼합량을 늘릴 수 있습니다 (결과적으로 SLG, SLO, SLR의 발광량을 모을 수 있습니다).● 2 색 분석에서는 SLG와 SLR의 조합을 권장합니다.
● 2색 또는 3색의 분리 방법에 대해서
이 페이지 에서 Microsoft ® Excel을 사용하여 계산 시트를 다운로드할 수 있습니다.
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| 품명 | Code No. | 포장 | 저장 온도 | 설명서 사양 | SDS | 법규제 ※ |
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| 품명 pSLR(PEST)-test | Code No.MRV-503 | 포장 20μg×1개 | 저장 온도 | 설명서 사양
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SDS | 법규제 ※ -20℃ |
제품 내용
Assay reagent *
*96 웰 플레이트의 경우 Assay Reagent 10 mL는 100 반응에 해당합니다.
- 주의사항
MultiReporter Assay System -Tripluc® - 벡터 는 본 제품에 포함되지 않습니다.
본제품의 구입시에는, 특허의 관계상 구입 신청서가 필요합니다.
아래 배너를 클릭하여 신청해 주시기를 부탁드립니다.
- 기본 반응 조건
MultiReporter Assay System - Tripluc ® -의 루시퍼 라제 유전자가 도입 된 세포 배양 *
↓
세포를 CO2 인큐베이터에서 꺼내 실온으로 되돌린다.
↓
각 웰에 세포 배양액과 동일한 양의 본 시약을 첨가
↓
실온에서 10분 동안 인큐베이션하여 세포를 완전히 용해
↓
루미노미터로 측정
* 투과율 설정을 위해 각 색상의 루시퍼 라제 유전자 플라스미드를 단독으로 트랜 스펙 션 한 샘플을 함께 준비하십시오.
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● 세포 배양 후, 그대로 발광 시약을 더해 측정하는 경우, 사용의 측정 기기에 적합한 백색 불투명 플레이트로 배양을 실시해 주세요.
●보다 정밀도가 높은 측정을 위해 SLG, SLO, SLR의 발광량이 가능한 한 동일한 레벨이 되도록 플라스미드의 혼합량을 조정해 주십시오(50배 이내). 이때 내부 표준으로는 SLG의 사용을 권장합니다. 내부 표준으로 SLG를 사용하면 많은 경우 내부 표준으로 첨가하는 플라스미드의 양을 억제하고 피험 서열에 연결된 SLO, SLR의 혼합량을 늘릴 수 있습니다 (결과적으로 SLG, SLO, SLR의 발광량을 모을 수 있습니다).● 2 색 분석에서는 SLG와 SLR의 조합을 권장합니다.
● 2색 또는 3색의 분리 방법에 대해서
이 페이지 에서 Microsoft ® Excel을 사용하여 계산 시트를 다운로드할 수 있습니다.
※ 법규제에 대해서
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