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Library Prep Kit [For DNA-seq]

GenNext® NGS Library Prep Kit [LPK-101]

가격표
용도
설명
특징
원리
실시예
관련 제품

가격표

일루미나 차세대 시퀀서용 라이브러리 준비 키트

품명	Code No.	포장	저장 온도	설명서 사양	SDS	법규제 ※
품명 GenNext NGS Library Prep Kit	Code No.LPK-101T	포장 8회용	저장 온도 -20℃	설명서 사양	SDS	법규제 ※ 없음
품명 GenNext NGS Library Prep Kit	Code No.LPK-101	포장 24회용	저장 온도 -20℃	설명서 사양	SDS	법규제 ※ 없음
품명 GenNext NGS Library Prep Kit	Code No.LPK-101L	포장 96회용	저장 온도 -20℃	설명서 사양	SDS	법규제 ※ 없음

용도
﻿﻿﻿● GenNext® NGS Library Prep Kit
설명
 GenNext ® NGS Library Prep Kit는 단편화 된 이중 가닥 DNA 및 PCR 산물에서 Illumina   차세대 시퀀서용 라이브러리를 조제하기 위한 키트입니다. 본 제품을 사용하여 간편하고 신속하게 라이브러리를 준비할 수 있습니다.
 본 제품에서는 1ng - 1㎍의 2본쇄 DNA 단편의 말단 수리 및 3'말단의 아데닐화를 실시한 후 T 오버행의 어댑터를 라이게이션합니다.
 입력하는 DNA량이 적고 라이브러리의 증폭이 필요한 경우는 유전자 변형형 KOD DNA polymerase를 사용하여 개발된 고정확성 PCR용 효소를 사용하여 말단에 어댑터 서열을 갖는 라이브러리를 저바이어스 에서 증폭합니다.
특징
● 간편하고 신속한 조작 플로우 말단 수리 및 3'말단의 아데닐화로부터 어댑터 라이게이션까지의 공정을 동일 용기 내에서 실시할 수 있습니다. 말단 수리 및 3' 말단 아데닐화는 15분, 어댑터 라이게이션은 15분 내에 실시할 수 있습니다. 라이브러리 증폭은 어닐링 10초, 신장 15초의 사이클로 실시할 수 있습니다.

 ● 광범위한 인풋 양 광범위한 인풋 양 (1ng - 1μg)에 대응하도록 설계되었습니다.

 ●저바이어스의 라이브러리 증폭 라이브러리 의 증폭에 사용하는 Library Amplification Master Mix에는 유전자 변형형 KOD DNA polymerase를 이용해 개발된 고정확성 PCR용 효소가 사용되고 있습니다. GC의 편향에 의한 증폭에의 영향을 최소한으로 억제하고 있어 다양한 영역을 균일하게 증폭할 수 있습니다.
원리
실시예
1.NGS를 이용한 라이브러리 준비 키트의 평가 MiSeq® (일루미나사) 및 MiSeq® Reagent Kit v2(300 Cycles)(일루미나사)를 이용하여 대장균 게놈(1μg PCR Free 또는 1ng 12사이클 증폭)의 차세대 시퀀서 분석을 실시했습니다. 도서관 준비는 GenNext ® NGS Library Prep Kit 또는 A 사 도서관 준비 키트를 사용하여 수행되었습니다.
 라이브러리 데이터는 리드수를 같게 하기 위해 다운 샘플링을 실시해, 각 샘플 100만 리드에 가지런히 해석했습니다. 분석은 CLC Genomics Workbench (키아겐 사 / CLC bio)를 사용했습니다. 


 그 결과 GenNext ® NGS Library Prep Kit는 A사의 시약에 비해 양호한 매핑률, 레퍼런스와의 일치율을 나타냈다.
 2. 라이브러리 수율 및 분포 비교 단편화 처리된 인간 게놈 DNA 1, 10, 100ng, 대장균 게놈 DNA 1μg, 또는 100bp DNA 래더 1, 10ng에서 GenNext ® NGS Library Prep Kit 또는 A사 라이브러리 준비 키트로 라이브러리를 조제했습니다.
 어댑터는 일루미나의 인덱스 어댑터, 라이브러리 정리는 Agencourt AMPure XP 시약 (Beckman Coulter)을 사용했습니다.
 1㎍은 증폭하지 않고, 1ng은 11사이클, 10ng는 8사이클, 100ng는 5사이클로 증폭하여, 라이브러리 사이즈의 분포를 MultiNA ® (시마즈 제작소)에서 확인했습니다. 라이브러리 수율은 GenNext ® NGS Library Quantification Kit [Code: NLQ-101]에서 확인했습니다. 



 결과적으로, 라이브러리 크기의 분포는 GenNext ® NGS Library Prep Kit와 A 사의 시약에서 동등하며, 낮은 입력량에서 GenNext ® NGS Library Prep Kit는 A 사의 시약에 비해 높은 수율을 나타냅니다. 네. 모두 MiSeq ® 에 제공하는 데 필요한 4nM 이상의 수율을 얻었습니다.
기타 실시예

제품 내용

【LPK-101T】
End Repair and A-tailing Buffer	80μL×1개
End Repair and A-tailing Enzyme	20μL×1개
Ligation Solution	400μL×1개
Library Amplification Master Mix	230μL×1개
Library Amplification Primer Mix	46μL×1개

【LPK-101】
End Repair and A-tailing Buffer	240μL×1개
End Repair and A-tailing Enzyme	60μL×1개
Ligation Solution	1,200μL×1개
Library Amplification Master Mix	690μL×1개
Library Amplification Primer Mix	138μL×1개

【LPK-101L】
End Repair and A-tailing Buffer	960μL×1개
End Repair and A-tailing Enzyme	240μL×1개
Ligation Solution	1,600μL×3개
Library Amplification Master Mix
	1,380μL×2개
Library Aplification Primer Mix	552μL×1개

※어댑터와 자성 비드(어댑터의 라이게이션 및 라이브러리 증폭 후의 정제용)는 포함되어 있지 않습니다.

어댑터 인덱스가 있는 Illumina ^® TruSeq ^® 와 같은 라이브러리 제작에 일반적으로 사용되는 어댑터를 사용할 수 있습니다.
(예)
IDT for Illumina ^® – TruSeq ^® DNA UD Indexes v2 (96 Indexes, 96 Samples)
카탈로그 번호:20040870
(상기 이외에도 같은 설계를 가진 어댑터라면 본 키트에서 사용할 수 있습니다.)

SPRI (solid phase paramagnetic bead) 자성 비드

Agencourt AMPure XP 시약 (Beckman Coulter) 카탈로그 번호 : A63880, A63881 등을 권장합니다. 사용 시에는 시약의 사용설명서를 따르십시오.

기본 반응 조건: 단편화 DNA
↓
말단 수리 및 3' 말단 아데닐화
↓
어댑터 라이게이션
↓
라이게이션 후 정제
↓
(DNA량이 적은 경우)
라이브러리 증폭
↓
라이브러리 증폭 후 정제
↓
(선택 사항)
사이즈 선택

관련상품

일루미나사 차세대 시퀀서용 라이브러리 정량 키트

품명	Code No.	포장	저장 온도	설명서 사양	SDS	법규제 ※
품명 GenNext NGS Library Quantification Kit	Code No.NLQ-101	포장 500회용/20μL 반응	저장 온도	설명서 사양	SDS	법규제 ※ -20℃

제품 내용

【LPK-101T】
End Repair and A-tailing Buffer	80μL×1개
End Repair and A-tailing Enzyme	20μL×1개
Ligation Solution	400μL×1개
Library Amplification Master Mix	230μL×1개
Library Amplification Primer Mix	46μL×1개

【LPK-101】
End Repair and A-tailing Buffer	240μL×1개
End Repair and A-tailing Enzyme	60μL×1개
Ligation Solution	1,200μL×1개
Library Amplification Master Mix	690μL×1개
Library Amplification Primer Mix	138μL×1개

【LPK-101L】
End Repair and A-tailing Buffer	960μL×1개
End Repair and A-tailing Enzyme	240μL×1개
Ligation Solution	1,600μL×3개
Library Amplification Master Mix
	1,380μL×2개
Library Aplification Primer Mix	552μL×1개

기본 반응 조건: 단편화 DNA
↓
말단 수리 및 3' 말단 아데닐화
↓
어댑터 라이게이션
↓
라이게이션 후 정제
↓
(DNA량이 적은 경우)
라이브러리 증폭
↓
라이브러리 증폭 후 정제
↓
(선택 사항)
사이즈 선택

※ 법규제에 대해서

독독물 및 극물 단속법 [의약용 외독물]

극독물 및 극물 단속법 [의약용 외극물]

위험소방법[위험물]

신구입시에 신청서의 제출이 필요한 제품

없음상기 법령이나 신청서의 제출에 해당하지 않는 제품

국가국민보호법[독소]

세트카르타헤나 법 (유전자 재조합 생물 등의 사용 등의 규제에 의한
생물의 다양성 확보에 관한 법률)

PPRTR법(화학물질 배출 파악 관리 촉진법) [신고 의무 물질]

노동노동안전보건법[통지 또는 표시의무물질]